[目的]研究維生素D受體（VDR）在PC-3細(xì)胞（前列腺癌細(xì)胞株）中的表達(dá)及其意義和通過(guò)短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA,s RNA）沉默靶基因的方式來(lái)探究VDR基因?qū)C-3細(xì)胞遷移能力和侵襲性的影響,并且探討VDR與腦膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因1（GLi1）相關(guān)性。[方法]1、依照PC-3細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)細(xì)胞;采用熒光定量PCR法在mRNA水平檢測(cè)PC-3細(xì)胞中VDR基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄水平;2、通過(guò)細(xì)胞免疫熒光法在蛋白水平檢測(cè)PC-3細(xì)胞中VDR蛋白表達(dá);3、質(zhì)粒和慢病毒包裝由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)并合成,選用針對(duì)VDR基因干擾效率最佳的 VDR-homo-433:5’GGAGTTCATTCTGACAGATGA3’作為干擾序列;4、把PC-3細(xì)胞分成空白對(duì)照組,陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組三組,培養(yǎng)液中不加入維生素D及維生素D類似物。構(gòu)建VDR-shRNA（+）慢病毒載體侵染實(shí)驗(yàn)組,VDR-shRNA（-）慢病毒組侵染陰性對(duì)照組,空白對(duì)照組不做處理,利用RT-PCR和Western Blot法分別在mRNA和蛋白水平檢測(cè)以上三細(xì)胞組VDR轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況;5、通過(guò)細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．電泳結(jié)果??

圖１細(xì)胞培養(yǎng)圖片（１００Ｘ）??；ＢＰＣ－３細(xì)胞傳代后Ｉｄ；?ＣＰＣ－３細(xì)胞傳胞傳代后３ｄ；?Ｅ?ＰＣ－３細(xì)胞傳代后４ｄ??Ａ電泳結(jié)果??ＲＮＡ進(jìn)行電泳純度檢測(cè)（１．５％瓊脂糖，ＩＸＲＮＡ電泳２８ｓ?ｒＲＮＡ、１８ｓ?ｒＲＮＡ兩條帶清帶，各組細(xì)胞提取的總ＲＮＡ沒(méi)有明顯污染ｒｋｅｒ，其只為檢測(cè)基因組污染，并不代表Ｒ

１．１．２?ＰＣＲ產(chǎn)物電泳??把各組提取的樣本在１．５％瓊脂糖（１５０Ｖ、１００ｍＡ２０ｍｉｎ）電泳下觀察，見(jiàn)??圖３，?ＰＣ－３細(xì)胞和陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞ＨＫ－２細(xì)胞均發(fā)現(xiàn)ＶＤＲ基因轉(zhuǎn)錄ｍＲＮＡ，而??且轉(zhuǎn)錄水平差異不明顯。??１４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小干擾RNA沉默HK-2細(xì)胞VDR及其對(duì)低枸櫞酸尿癥的意義[J]. 李康健,羅鈺輝,莫茵,申吉泓,劉孝東,李顥.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(10)
[2]Loss of the vitamin D receptor in human breast and prostate cancers strongly induces cell apoptosis through downregulation of Wnt/β-catenin signaling[J]. Yu Zheng,Trupti Trivedi,Ruby CY Lin,Colette Fong-Yee,Rick Nolte,Jeline Manibo,Yunzhao Chen,Musharraf Hossain,Konstantin Horas,Colin Dunstan,Hong Zhou,Markus J Seibel.  Bone Research. 2017(03)
[3]維生素D受體和P-糖蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 房棟,李成軍,胡萍萍,陳淼.  疑難病雜志. 2016(10)
[4]VDR和NaDC1在HK-2細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)低枸櫞酸尿癥的意義[J]. 李康健,莫茵,申吉泓,羅鈺輝,劉孝東,李顥.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(01)
[5]Gli-1 siRNA對(duì)PANC-1增殖及凋亡的影響[J]. 王偉,張炳太,李茂嵐,林鎮(zhèn)海.  中國(guó)醫(yī)療前沿. 2010(23)



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