一、課題背景膠質(zhì)瘤是發(fā)生于神經(jīng)外胚層的腫瘤,其侵襲性及增殖能力較強,具有高發(fā)病率、高術(shù)后復發(fā)率、高病死率及低治愈率的特點,是威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一。并且,惡性膠質(zhì)瘤難以通過手術(shù)根治且對放化療普遍不敏感,同時,現(xiàn)有的惡性膠質(zhì)瘤放射增敏劑普遍存在著增敏效果差、毒副作用大等缺陷,且其放射增敏效果仍然存在爭議,難以滿足臨床上膠質(zhì)瘤放射增敏的需求。因此,尋找惡性膠質(zhì)瘤放射增敏的新靶點,進一步提高惡性膠質(zhì)瘤的放療效果,具有十分重要的臨床意義。在腫瘤放療領(lǐng)域的研究中,放療抵抗的產(chǎn)生機制尚未完全清楚,高效的放射增敏新基因的研究亟待加強。近年來,隨著腫瘤生物學和放射腫瘤學的發(fā)展,針對腫瘤放射敏感性相關(guān)基因的靶向治療成為研究熱點,而全基因組篩選文庫有望從人類全基因組的角度篩選出更高效的腫瘤放射增敏靶點。CRISPR Cas9技術(shù)是近年來發(fā)展迅速的一項基因編輯技術(shù),在此基礎(chǔ)上構(gòu)建的CRISPR Cas9人類全基因組文庫為篩選腫瘤放射增敏新靶點提供了新的方法。本研究中,我們使用CRISPR Cas9人類全基因組文庫感染了惡性人腦膠質(zhì)瘤細胞,并通過高通量測序陰性篩選的方法,發(fā)現(xiàn)了放射增敏新靶點TTC9C... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：149 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

DNA損傷修復示意

技術(shù)路線圖

?可稈〉某Ｓ貌唄鑰梢苑治?糶隕稈?Positiveselectionscreen)和陰性篩選(Negativeselectionscreen)56。陽性篩選指的是對已成功整合sgRNA的細胞文庫施加一定的篩選壓力，僅使少數(shù)目的表型的細胞能夠存活，從而達到富集關(guān)鍵基因的目的。陰性篩選與之相反，存活的細胞并不是目的表型細胞，因此需要比較不同時間點sgRNA的豐度，找出差異sgRNA來確定關(guān)鍵基因。兩種篩選方式通常都需要與高通量測序技術(shù)結(jié)合，通過高通量測序獲得樣品中細胞的sgRNA序列信息，再通過生物信息學分析排除假陽性結(jié)果繼而確定可能的候選基因(圖3)。圖3.CRISPRCas9文庫高通量篩選模式示意圖57

【參考文獻】：
期刊論文
[1]甘氨雙唑鈉對肺癌體內(nèi)外放射治療的增敏作用[J]. 張霞,季洪兵,陳忠華,歐陽學農(nóng).  福州總醫(yī)院學報. 2006(03)
[2]甘氨雙唑鈉對肺癌體內(nèi)外放射治療的增敏作用[J]. 張霞,季洪兵,陳忠華,歐陽學農(nóng).  福州總醫(yī)院學報. 2006 (03)
[3]甘氨雙唑鈉對肺癌體內(nèi)外放射增敏作用研究[J]. 張霞,季洪兵,陳忠華,歐陽學農(nóng),楊如俊.  中華放射醫(yī)學與防護雜志. 2005(04)
[4]甘氨雙唑鈉及其一個微量成分的質(zhì)譜研究[J]. 王志蓓,徐永珍,吳厚銘,高建國,鄭秀龍,丁旭剛.  質(zhì)譜學報. 2000(Z1)



本文編號：3605378