一、課題背景膠質(zhì)瘤是發(fā)生于神經(jīng)外胚層的腫瘤,其侵襲性及增殖能力較強(qiáng),具有高發(fā)病率、高術(shù)后復(fù)發(fā)率、高病死率及低治愈率的特點(diǎn),是威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一。并且,惡性膠質(zhì)瘤難以通過(guò)手術(shù)根治且對(duì)放化療普遍不敏感,同時(shí),現(xiàn)有的惡性膠質(zhì)瘤放射增敏劑普遍存在著增敏效果差、毒副作用大等缺陷,且其放射增敏效果仍然存在爭(zhēng)議,難以滿足臨床上膠質(zhì)瘤放射增敏的需求。因此,尋找惡性膠質(zhì)瘤放射增敏的新靶點(diǎn),進(jìn)一步提高惡性膠質(zhì)瘤的放療效果,具有十分重要的臨床意義。在腫瘤放療領(lǐng)域的研究中,放療抵抗的產(chǎn)生機(jī)制尚未完全清楚,高效的放射增敏新基因的研究亟待加強(qiáng)。近年來(lái),隨著腫瘤生物學(xué)和放射腫瘤學(xué)的發(fā)展,針對(duì)腫瘤放射敏感性相關(guān)基因的靶向治療成為研究熱點(diǎn),而全基因組篩選文庫(kù)有望從人類全基因組的角度篩選出更高效的腫瘤放射增敏靶點(diǎn)。CRISPR Cas9技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展迅速的一項(xiàng)基因編輯技術(shù),在此基礎(chǔ)上構(gòu)建的CRISPR Cas9人類全基因組文庫(kù)為篩選腫瘤放射增敏新靶點(diǎn)提供了新的方法。本研究中,我們使用CRISPR Cas9人類全基因組文庫(kù)感染了惡性人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞,并通過(guò)高通量測(cè)序陰性篩選的方法,發(fā)現(xiàn)了放射增敏新靶點(diǎn)TTC9C... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：149 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

DNA損傷修復(fù)示意

技術(shù)路線圖

?可稈〉某Ｓ貌唄鑰梢苑治?糶隕稈?Positiveselectionscreen)和陰性篩選(Negativeselectionscreen)56。陽(yáng)性篩選指的是對(duì)已成功整合sgRNA的細(xì)胞文庫(kù)施加一定的篩選壓力，僅使少數(shù)目的表型的細(xì)胞能夠存活，從而達(dá)到富集關(guān)鍵基因的目的。陰性篩選與之相反，存活的細(xì)胞并不是目的表型細(xì)胞，因此需要比較不同時(shí)間點(diǎn)sgRNA的豐度，找出差異sgRNA來(lái)確定關(guān)鍵基因。兩種篩選方式通常都需要與高通量測(cè)序技術(shù)結(jié)合，通過(guò)高通量測(cè)序獲得樣品中細(xì)胞的sgRNA序列信息，再通過(guò)生物信息學(xué)分析排除假陽(yáng)性結(jié)果繼而確定可能的候選基因(圖3)。圖3.CRISPRCas9文庫(kù)高通量篩選模式示意圖57

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]甘氨雙唑鈉對(duì)肺癌體內(nèi)外放射治療的增敏作用[J]. 張霞,季洪兵,陳忠華,歐陽(yáng)學(xué)農(nóng).  福州總醫(yī)院學(xué)報(bào). 2006(03)
[2]甘氨雙唑鈉對(duì)肺癌體內(nèi)外放射治療的增敏作用[J]. 張霞,季洪兵,陳忠華,歐陽(yáng)學(xué)農(nóng).  福州總醫(yī)院學(xué)報(bào). 2006 (03)
[3]甘氨雙唑鈉對(duì)肺癌體內(nèi)外放射增敏作用研究[J]. 張霞,季洪兵,陳忠華,歐陽(yáng)學(xué)農(nóng),楊如俊.  中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志. 2005(04)
[4]甘氨雙唑鈉及其一個(gè)微量成分的質(zhì)譜研究[J]. 王志蓓,徐永珍,吳厚銘,高建國(guó),鄭秀龍,丁旭剛.  質(zhì)譜學(xué)報(bào). 2000(Z1)



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