目的食管癌是消化系統(tǒng)最具侵略性的惡性腫瘤之一,其特點(diǎn)是死亡率高,預(yù)后差。我國是食管癌的高發(fā)地區(qū),食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）是我國食管癌發(fā)生的主要組織學(xué)亞型。由于早期癥狀不明顯,臨床上大多數(shù)患者往往一經(jīng)診斷即為晚期,因此錯(cuò)過了手術(shù)機(jī)會,而以放化療的治療方式為主。因此,患者對化療藥物的應(yīng)答尤為重要。EphA2是Eph受體超家族的成員,被發(fā)現(xiàn)在多種癌癥中過表達(dá),包括前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、肺癌、食管癌等,是研究較為廣泛的一個(gè)抗癌藥物開發(fā)靶點(diǎn)。針對酪氨酸激酶的靶向藥物達(dá)沙替尼和恩沙替尼對其也有著抑制作用。但近年來,隨著研究的開展,發(fā)現(xiàn)EphA2在癌癥中的作用缺乏一致性。有證據(jù)表明EphA2促進(jìn)了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,敲低EphA2后抑制了癌癥的轉(zhuǎn)移和血管生成,也有文獻(xiàn)報(bào)道EphA2能抑制致癌的Akt-mTORC1和RAS-ERK信號傳導(dǎo),敲低EphA2后表現(xiàn)出促進(jìn)了癌細(xì)胞的生長、遷移和侵襲。這證明EphA2在癌癥中具有雙重作用,因此影響了相關(guān)靶向藥物在臨床的應(yīng)用和療效的判定。2001年,發(fā)現(xiàn)EphA2是p53家族（p53,p63和p73）的靶基因,確定了位于EphA2啟動(dòng)子中的p53反應(yīng)元... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＥｐｈＡ２和ｐ５３在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況

?實(shí)驗(yàn)結(jié)果???３．２?ＥｐｈＡ２和ｐ５３在食管鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)情況??我們通過蛋白質(zhì)免疫印跡的實(shí)驗(yàn)方法來檢測食管鱗癌細(xì)胞中ｐ５３和ＥｐｈＡ２??的表達(dá)情況，確認(rèn)了食管鱗癌細(xì)胞中的ｐ５３狀態(tài)，同時(shí)也為后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞??系的篩選提供了依據(jù)。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果圖２顯示，ｐ５３在ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ５１０、??Ｅｃａｌ０９中相對低表達(dá)，在ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、ＫＹＳＥ４５０中相對高表達(dá)。和??之前報(bào)道?ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ５１０、Ｅｃａｌ０９?為?ｐ５３?野生型細(xì)胞，ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、??ＫＹＳＥ４５０為ｐ５３突變型細(xì)胞相一致［２５＇２６］。同時(shí)，在ｐ５３野生型細(xì)胞ＫＹＳＥ３０、??ＫＹＳＥ５１０、Ｅｃａｌ０９?中，ＫＹＳＥ３０?和?Ｅｃａｌ０９?中?ＥｐｈＡ２?的表達(dá)相對較高，在?ｐ５３??突變型細(xì)胞?ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、ＫＹＳＥ４５０?中，ＫＹＳＥ１５０?的?ＥｐｈＡ２?表達(dá)相對??較高。因此，在本實(shí)驗(yàn)中，選取ｐ５３狀態(tài)不同，ＥｐｈＡ２表達(dá)相對較高的ＫＹＳＥ３０、??Ｅｃａｌ０９、ＫＹＳＥ１５０細(xì)胞來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。??ｗ?Ｍ?Ｍ?Ｍ?ｗ?ｗ??ｐ５３?——５３ＫＤａ??ＥｐｈＡ２?￣?？屬■■？一?１２５ＫＤａ??ＧＡＰＤＨ?—３７ＫＤａ??圖２?ｐ５３和ＥｐｈＡ２在食管鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)情況??３．３敲低ＥｐｈＡ２對ｐ５３野生型食管鱗癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的影??響??３．３．１?ｐ５３野生型食管鱗癌敲低ＥｐｈＡ２的細(xì)胞穩(wěn)株的建立及檢測??用一組ｓｈＥｐｈＡ２慢病毒感染ｐ５３野生型并高表達(dá)ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９??２８??

?實(shí)驗(yàn)結(jié)果???Ｃ??Ｅｃａｌ０９???ｓｈＣｔｒｌ?ｓｈＥｐｈＡ２－ｌ?ｓｈＥｐｈＡ２－２?ｓｈＥｐｈＡ２－３??■?■■■??Ｄ??Ｅｃａｌ０９???ＥｐｈＡ２?ｍｍ?＊?？?＿?＿？一?１２５ＫＤａ??ＧＡＰＤＨ?—?３７ＫＤａ??圖３敲低ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９細(xì)胞的檢測。Ａ熒光顯微鏡下敲低ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０??細(xì)胞拍照（比例尺５〇〇＾１１１１），８為以６３１６１１＾１〇１檢測８１＾０１１八２慢病毒對反丫８￡３〇細(xì)胞的敲??低效率，Ｃ熒光顯微鏡下敲低ＥｐｈＡ２的Ｅｃａｌ０９細(xì)胞拍照（比例尺５００（ｉｍ）?，?Ｄ為Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ檢測ｓｈＥｐｈＡ２慢病毒對Ｅｃａｌ０９細(xì)胞的敲低效率。??３．３．２敲低ＥｐｈＡ２促進(jìn)了?ｐ５３野生型食管鱗癌細(xì)胞的增殖能力??腫瘤細(xì)胞不受正常生長調(diào)控系統(tǒng)的控制，能持續(xù)地分裂與增殖，無限增殖??是腫瘤細(xì)胞最基本的特點(diǎn)。為了研究ＥｐｈＡ２對ｐ５３不同狀態(tài)的細(xì)胞的影響，我??們在ｐ５３野生型細(xì)胞ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９中敲低ＥｐｈＡ２，用ＣＣＫ－８法檢測ＥｐｈＡ２??對ｐ５３野生型食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響。ＣＣＫ－８實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與對照組相比??用ｓｈＥｐｈＡ２－ｌ慢病毒感染ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９細(xì)胞后，敲低ＥｐｈＡ２的表達(dá)明顯促??進(jìn)了?ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９細(xì)胞的增殖，如圖４所示。??３０??


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