目的:明確DCC-2036對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞增殖、侵襲、遷移的抑制作用。方法:體外實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)以結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo細(xì)胞系作為研究模型;用流式技術(shù)來檢測DCC-2036處理后LoVo細(xì)胞凋亡的改變;用克隆形成實(shí)驗(yàn)來檢測DCC-2036處理后LoVo細(xì)胞增殖能力的改變;用Transwell實(shí)驗(yàn)來檢測DCC-2036處理后LoVo細(xì)胞侵襲能力的改變;用劃痕實(shí)驗(yàn)來檢測DCC-2036處理后LoVo細(xì)胞遷移能力的改變;使用Western Blotting檢測DCC-2036處理后LoVo細(xì)胞EMT標(biāo)志物的改變;體內(nèi)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)以LoVo細(xì)胞移植成瘤的裸鼠作為研究模型,通過測量和統(tǒng)計(jì)分析瘤體大小變化來檢測DCC-2036藥物處理后移植瘤的增長差異;通過HE染色及免疫組化來檢測DCC-2036給藥處理后移植瘤鏡下形態(tài)和增殖指標(biāo)的差異。結(jié)果:1.通過MTS實(shí)驗(yàn)證明了DCC-2036能夠抑制LoVo細(xì)胞的細(xì)胞活力。2.通過Annexin V-FITC/PI雙染流式檢測表明DCC-2036能夠誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞的凋亡。3.通過克隆形成實(shí)驗(yàn),證明了DCC-2036能夠明顯的抑制LoVo細(xì)胞的增殖能力。4.通過T... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

調(diào)亡誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證實(shí)DCC-2036能顯著誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞的凋亡

16圖2調(diào)亡誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證實(shí)DCC-2036能顯著誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞的凋亡。注：上圖為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表性圖。梯度濃度（0-5.0μM）的DCC-3026處理細(xì)胞48h，再用AnnexinV-FITC/PI雙染流式檢測計(jì)數(shù)來檢測細(xì)胞調(diào)亡情況。右上象限是晚期凋亡細(xì)胞。3.3DCC-2036對LoVo細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響3.3.1DCC-2036抑制LoVo細(xì)胞克隆形成通過克隆形成實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證DCC-2036對LoVo細(xì)胞長期增殖能力的影響，結(jié)果顯示：DCC-2036（2.5μMol）處理組LoVo細(xì)胞的克隆形成數(shù)目和體積均顯著少于不加藥組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）（圖3.1）。DCC-2036能明顯抑制LoVo細(xì)胞的增殖能力。圖3.1克隆形成實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DCC-2036明顯LoVo細(xì)胞的克隆形成。注：對照組0umol，處理組2.5umolDCC-2036處理48h；圖左側(cè)為三次克隆形成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表圖;使用ImageJ軟件進(jìn)行克隆計(jì)數(shù)；圖右側(cè)為統(tǒng)計(jì)圖。使用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，***代表P值<0.001。

173.3.2DCC-2036抑制LoVo細(xì)胞的侵襲能力為了進(jìn)一步研究DCC-2036對LoVo細(xì)胞的侵襲能力是否有抑制作用，通過Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DCC-2036處理組LoVo細(xì)胞的侵襲能力下降，顯微鏡下可見加藥組穿膜細(xì)胞數(shù)目較對照組明顯偏少，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）（圖3.2）。結(jié)果表明DCC-2036能夠明顯抑制結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞的侵襲能力。圖3.2Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DCC-2036能夠明顯抑制LoVo細(xì)胞侵襲能力(100x)。注：選取細(xì)胞密度6.0×105cell的LoVo細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，，加藥組2.5μmolDCC-2036處理48h；圖左，三次獨(dú)立的Transwell實(shí)驗(yàn)的侵襲細(xì)胞的代表性圖像；使用ImageJ統(tǒng)計(jì)穿膜細(xì)胞數(shù)目；圖右，柱狀圖，顯示了來自三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)侵襲細(xì)胞的百分比；使用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，***P<0.001。3.3.3DCC-2036抑制LoVo細(xì)胞的遷移能力劃痕實(shí)驗(yàn)可用于檢測細(xì)胞遷移能力，為了探究DCC-2036對LoVo細(xì)胞遷移能力的影響，我們通過劃痕實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示，0~48小時(shí)對照及加藥組的劃痕寬度均有所縮小，但明顯可見加藥組的劃痕愈合趨勢較對照組弱（圖3.3A）；0~48小時(shí)加藥組的細(xì)胞遷移能力較對照組下降，其細(xì)胞的愈合距離明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3.3B，P<0.05）,說明DCC-2036抑制了LoVo細(xì)胞的遷移能力。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3581123