目的:砷（Arsenic,As）可以通過調(diào)控miRNA-21基因的表達(dá),改變PTEN/mTOR通路的活性來影響肝細(xì)胞的增殖;原花青素（Grape seed proanthocyanidin extract,GSPE）能夠清除細(xì)胞內(nèi)過多的ROS來維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡體系進(jìn)而抑制砷對肝細(xì)胞造成的氧化應(yīng)激毒性。但目前關(guān)于原花青素能否通過miRNA-21/PTEN/mTOR通路抑制砷對肝細(xì)胞造成的惡性增殖的研究仍然未見報(bào)道。因此,本研究利用原花青素和砷對L-02細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),探討原花青素對砷誘導(dǎo)L-02細(xì)胞增殖的抑制效果以及miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝細(xì)胞惡性增殖中的作用,為完善原花青素的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。方法:本次實(shí)驗(yàn)采用L-02細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對象,利用As³⁺（2μmol/L）,GSPE（50mg/L）,miRNA-21 inhibitor及PTEN siRNA干預(yù)細(xì)胞24h后,檢測miRNA-21、mTOR、PTEN、PI3K、AKT及PCNA、Ki-67的轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平;CCK-8分析細(xì)胞活性;使用Transwell實(shí)驗(yàn)闡... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度NaAsO2處理肝L-02細(xì)胞24小時(shí)后對細(xì)胞形態(tài)的影響

miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝L-02細(xì)胞惡性增殖中的作用161.2不同濃度GSPE對肝L-02細(xì)胞形態(tài)的影響使用0、25、50、75mg/L的GSPE處理肝L-02細(xì)胞24小時(shí)，觀察不同濃度GSPE對肝L-02細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在對照組中肝L-02細(xì)胞形態(tài)呈菱形，多邊形，細(xì)胞周圍有若干突起，交錯(cuò)排列生長，如圖2中綠圈所示。在25、50mg/LGSPE處理下，肝L-02細(xì)胞形態(tài)仍然呈菱形、多邊形生長，且相互之間交錯(cuò)排列。在75mg/LGSPE處理下，肝L-02細(xì)胞形態(tài)由菱形或多邊形變?yōu)闄E圓形或者不規(guī)則的形狀，細(xì)胞周圍的突起消失不見，且顯微鏡下觀察到細(xì)胞量相較于正常情況下更少。圖2.不同濃度GSPE處理肝L-02細(xì)胞24小時(shí)后對細(xì)胞形態(tài)的影響注：綠圈所示細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常；紅圈所示細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，發(fā)生明顯改變。

miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝L-02細(xì)胞惡性增殖中的作用19注：*與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。圖3.不同濃度NaAsO2對肝L-02細(xì)胞活性影響的時(shí)間反應(yīng)關(guān)系注：表示和0時(shí)刻相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。2.3不同濃度NaAsO2對肝L-02細(xì)胞活性影響的劑量反應(yīng)關(guān)系如圖4所示，實(shí)驗(yàn)中使用不同濃度的NaAsO2分別處理細(xì)胞0、6、12、24、48小時(shí)，觀察在不同時(shí)間點(diǎn)下，不同劑量NaAsO2對肝L-02細(xì)胞活性影響的作用濃度和處理時(shí)間之間的關(guān)系。結(jié)果表明，與對照組(100.787±11.505)的細(xì)胞活性相比，在2μmol/L(146.866±2.957)、4μmol/L(133.772±3.518)、6μmol/L(129.384±1.854)NaAsO2處理肝L-02細(xì)胞24h后，細(xì)胞活性明顯增強(qiáng)(P<0.05)，但是升高的趨勢不如2μmol/LNaAsO2處理后明顯。有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)10μmol/LNaAsO2(83.114±6.925)處理肝L-02細(xì)胞24h后與對照組(100.787±11.505)相比細(xì)胞活性明顯減弱(P<0.05)，我們也發(fā)現(xiàn)當(dāng)6μmol/L(102.442±8.668)、8μmol/L(94.129±11.654)、10μmol/L(85.048±13.378)As處理細(xì)胞48小時(shí)后與對照組(120.064±15.075)相比也可以降低肝L-02細(xì)胞的活性(P<0.05)。以上結(jié)果表明，2μmol/LNaAsO2處理肝L-02細(xì)胞24小時(shí)后可以使細(xì)胞活性升高，較高濃度NaAsO2處理肝L-02細(xì)胞24、48小時(shí)后可以使細(xì)胞活性降低。表3.不同濃度NaAsO2對肝L-02細(xì)胞活性影響的劑量反應(yīng)關(guān)系Time(h)Dose(μmol/L)0246810098.722±4.844105.407±22.721107.677±14.90095.850±16.17488.792±19.32882.616±16.0806109.793±17.678116.408±23.256124.443±28.101112.605±18.17693.805±27.39789.127±15.16112109.337±6.527111.167±24.467117.410±29.398119.407±26.600101.275±7.79785.319±16.43424100.787±11.505146.86

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3578694