肝細(xì)胞癌是全球癌癥相關(guān)的第四大死亡原因,絕大多數(shù)的肝細(xì)胞癌患者病情出現(xiàn)反復(fù)并且5年生存率均低于10%。在治療過(guò)程中肝細(xì)胞癌對(duì)放療和化療均不敏感,對(duì)于晚期病人來(lái)說(shuō)長(zhǎng)期以來(lái)都沒(méi)有極有效治療方法來(lái)提高生存率。2007年,索拉非尼被美國(guó)食品及藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)為肝細(xì)胞癌唯一一線靶向治療藥物,可以使患者的中位生存期從7.9個(gè)月延長(zhǎng)到10.7個(gè)月,平均增加了近3個(gè)月。索拉非尼是一種口服多重激酶抑制劑,能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制血管生成和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。索拉非尼的抗腫瘤作用主要是阻斷生長(zhǎng)因子信號(hào),例如VEGFR、PDGFR以及下游的 RAF/MEK/ERK級(jí)聯(lián)反應(yīng)。索拉非尼能夠通過(guò)降低Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路中的Raf1、B-Raf和激酶活性來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。索拉非尼還可以通過(guò)抑制肝細(xì)胞因子受體（c-Kit）、類Fms酪氨酸激酶（FLT-3）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR-2、VEGFR-3）、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體（PDGFR-β）和其他酪氨酸激酶活性來(lái)抑制血管生成。此外,索拉非尼通過(guò)減少腫瘤細(xì)胞中e1F4E磷酸化表達(dá)和Mcl-1表達(dá),從而促使細(xì)胞發(fā)生凋亡。索拉非尼能... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖２．Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測(cè)ＰＲＭＴ５、Ｐ－ＥＲＫ、ＥＲＫ在索拉非尼處理的肝??癌細(xì)胞系中蛋白的表達(dá)水平

山東大學(xué)碩士論文???８?ｐＭ、１６?ｐＭ、３２?｜ａＭ、６４?ｐＭ，對(duì)９６孔板樣品進(jìn)行聯(lián)合加藥培養(yǎng)１??天，ＣＣＫ－８測(cè)定細(xì)胞活力。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，索拉非尼與ＨＬＣＬ??聯(lián)合使用對(duì)三種肝癌細(xì)胞系都有聯(lián)合殺傷作用，ＳＫ－Ｈｅｐ－１在索拉非尼??８ｐＭ和ＨＬＣＬ１６ｎＭ時(shí)細(xì)胞活力低，聯(lián)合殺傷效果最明顯；ＨｅｐＧ２在??索拉非尼為８?ｐＭ和ＨＬＣＬ為１６?ｐＭ時(shí)細(xì)胞活力低，聯(lián)合殺傷效果顯??著；Ｈｕｈ７在索拉非尼為８ｐＭ和ＨＬＣＬ為８ｐＭ時(shí)細(xì)胞活力低，聯(lián)合??殺傷效果顯著（圖３）。??ａａ〇ｔ２?４８ｌ？３２ｉｊＭ?Ｋａ〇１?２４?８１？３２？Ｍ?ＨＵＸ０１２?４｜ｆ８３２（Ｍ??ｏ?ｅｆｔ?ｅ．ｎ?ｅ．ｓ？?９?ｍ?Ｍｌ＇?ｍ?｝叫??Ｉ．Ｍ?？？ｊ?Ｑ?？：?ｔ＊１＾Ｈ?０?９１?０．Ｕ?０－Ｍ?ｔｉｌ?０?Ｃ！?ａｎ?？?Ｎｒ?ｆｔ?＜：．?９?ｎ?Ｈ??�！�，Ｉ，一?＿?■?ｉ?ｐｒ“．??；ｃ?��！?ｔ?：?Ｋ?Ｃ？?９?Ｔ：?Ｓ?Ｍ?８?Ｍ?２?０?１２?Ｃ．８４?Ｏ?ＳＳ?０?１２?０?Ｍ?２?０?ＳＩ?０?Ｗ?９Ｕ?０?ｒｌ?９．？）?｝?ｉ）??５；??ｔｎ?＆ｗ?ｏｉ＾?Ｍｉ?：：：嫌??ｃｕ?��；＜ｈｈ??ＳＫ－Ｈｅｐ－１?ＨｅｐＧ２?Ｈｕｈ７??圖３．聯(lián)合用藥對(duì)肝癌細(xì)胞系具有聯(lián)合殺傷效果。??我們使用Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔ軟件分析ＨＬＣＬ與索拉非尼聯(lián)合處理的作用??效果［３１］，通過(guò)對(duì)結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)，在三種肝癌細(xì)胞系中，ＨＬＣＬ與索??拉非尼聯(lián)合處理體現(xiàn)出協(xié)同殺傷作用：ＳＫ－Ｈｅｐ－１在ｓｏｒａｆｅｎｉｂ８｜ｉＭ和??ＨＬＣＬ１６?ｎＭ時(shí)細(xì)胞活力低，ｓｏ

?山東大學(xué)碩士論文???＿??ＨＬＣＬ（ｍＭ）?，６＾＾８?Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ（｜ｊＭ）＂??ＨｅｐＧ２??圖４．?Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔ軟件分析聯(lián)合用藥對(duì)肝癌細(xì)胞系具有協(xié)同殺傷效果。??４．索拉非尼與ＰＲＭＴ５抑制劑聯(lián)合使用會(huì)抑制肝癌細(xì)胞克隆形??成能力??通過(guò)ＣＣＫ－８方法檢測(cè)到索拉非尼與ＰＲＭＴ５抑制劑ＨＬＣＬ聯(lián)合使??用會(huì)影響腫瘤細(xì)胞活力，我們想要進(jìn)一步驗(yàn)證索拉非尼與ＨＬＣＬ對(duì)細(xì)??胞聯(lián)合作用。細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)反映了腫瘤細(xì)胞在初始細(xì)胞極少情況??下的増殖能力，為了檢測(cè)ｓｏｒａｆｅｎｉｂ與ＨＬＣＬ聯(lián)合使用對(duì)肝癌細(xì)胞克隆??形成能力的影響，我們選擇ＳＫ－Ｈｅｐ－１、ＨｅｐＧ２和Ｈｕｈ７三種細(xì)胞系進(jìn)??行克隆形成實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)于ＳＫ－Ｈｅｐ－１來(lái)說(shuō)，單獨(dú)使用２??ｓｏｒａｆｅｎｉｂ或４?（ａＭ?ＨＬＣＬ與使用４?ＤＭＳＯ對(duì)照組的細(xì)胞克隆形成能??力差別不大，但是ｓｏｒａｆｅｎｉｂ和ＨＬＣＬ兩種藥物共同使用后，細(xì)胞克隆??數(shù)目減少十分明顯（圖５）。ＨｅｐＧ２經(jīng)過(guò)４［ｉＭｓｏｒａｆｅｎｉｂ或２（ｉＭＨＬＣＬ??處理１４天后，細(xì)胞克隆數(shù)目略少于經(jīng)過(guò)４?ｐＭＤＭＳＯ處理，ｓｏｒａｆｅｎｉｂ??與ＨＬＣＬ聯(lián)合培養(yǎng)的細(xì)胞克隆數(shù)目顯著少于其他實(shí)驗(yàn)組（圖６）。對(duì)于??Ｈｕｈ７來(lái)說(shuō)，４｜ａＭＤＭＳ０組、２ｐＭ索拉非尼組、４｜ａＭＨＬＣＬ組的細(xì)胞??數(shù)目相差不大，而聯(lián)合加藥培養(yǎng)的細(xì)胞克隆數(shù)目與其他三組相比顯著??減少（圖７）。通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了索拉非尼與ＰＲＭＴ５抑制劑聯(lián)??合使用會(huì)抑制肝癌細(xì)胞克隆形成能力。值得一提的是，以上使用的索??拉非尼的濃度遠(yuǎn)低于該藥物的半數(shù)致死劑量（ＩＣ５Ｑ），說(shuō)明索拉非尼與??ＰＲＭ


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