目的:探討Rac1蛋白對肝癌SK-Hep1和p⁰SK-Hep1細胞凋亡及壞死性凋亡的影響及其機制,明確Rac1調(diào)控肝癌細胞凋亡及壞死性凋亡的方式,從而為肝癌的基因靶向治療研究提供新的實驗依據(jù)。方法:1、體外培養(yǎng)SK-Hep1細胞,并誘導其線粒體DNA缺陷細胞（p⁰SK-Hep1）,應(yīng)用臺盤藍排除法鑒定活細胞,采用RT-PCR法檢測COX-I及COX-II的表達。2、選取壞死性凋亡抑制劑Nec-1的三種不同濃度（30μM、60μM、90μM）和廣譜凋亡抑制劑 z-VAD-FMK（10μM、20μM、40μM）作用于 SK-Hep1 細胞 24 h,MTS法檢測藥物的最適作用濃度,采用流式細胞術(shù)檢測凋亡及壞死性凋亡比例。3、加入RaclsiRNA下調(diào)Rac1在SK-Hep1和p⁰SK-Hep1細胞中的表達,采用流式細胞術(shù)檢測凋亡率和壞死性凋亡率。4、用已篩選出的最佳作用濃度的Nec-1和z-VAD-FMK預處理SK-Hep1細胞和p⁰SK-Hep1細胞24 h,分別轉(zhuǎn)染FADD,RIP1和TRAF6三種... 

【文章來源】：延邊大學吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?（ａ）?：?ｐ°ＳＫ在不含丙酮酸和尿嘧啶核苷的培養(yǎng)基中生長第六天，幾乎沒有活細胞出現(xiàn)：??

在ＳＫ細胞中，ＣＯＸ－Ｉ、Ｃ０Ｘ－ＩＩ和ＧＡＰＤＨ均可表達，而在ｐ°ＳＫ??細胞中，ＣＯＸ－?Ｉ及Ｃ０Ｘ－ＩＩ幾乎不表達，只有ＧＡＰＤＨ條帶出現(xiàn)（Ｐ＜０．?０１）。??這些結(jié)果表明，我們成功構(gòu)建了線粒體ＤＮＡ缺陷細胞模型（圖２）。??１５??

?（Ｐ＜０．?０５）?Ｊ－ＶＡＤ－ＦＭＫ?濃度為?２０?（ｉＭ?時細胞生存率為?９１．?１０％＞?８７．?８２％??（４０?＿），（Ｐ＜０．?０５）。故選用濃度為６０?—的Ｎｅｃ－１和濃度為２０?—的??Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫ干預細胞（表１、

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]Rac1及IRAK1在肝癌細胞中對細胞凋亡和壞死性凋亡的影響[D]. 張富敏.延邊大學 2017
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本文編號：3566068