目的揭示DTX3L在多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）細胞粘附過程中的作用機制,并探索DTX3L在MM細胞對蛋白酶體抑制劑（Proteasome inhibitor,PI）硼替佐米（Bortezomib,Bort）的耐藥過程中發(fā)揮的作用。為提高多發(fā)性骨髓瘤治療療效、改善預后方面提供新的理論依據(jù)。方法1.使用無血清培養(yǎng)液養(yǎng)多發(fā)性骨髓瘤細胞72h后,換用含血清培養(yǎng)液培養(yǎng)骨髓瘤細胞48h。細胞增殖過程中,蛋白免疫印跡檢測DTX3L,增殖相關(guān)蛋白PCNA,CDK2及細胞周期蛋白cyclinE的表達。同時,通過流式檢測細胞周期的改變。2.在骨髓瘤細胞中干擾DTX3L的表達,Western Blot檢測增殖相關(guān)蛋白PCNA,CDK2及細胞周期蛋白cyclinE的表達,CCK-8檢測細胞活力,流式檢測細胞周期的分布。3.將骨髓瘤細胞RPMI 8226和NCI-H929與骨髓基質(zhì)細胞HS-5或者纖連蛋白（Fibronection,FN）共培養(yǎng)構(gòu)建粘附模型。Western Blot檢測DTX3L在骨髓瘤細胞懸浮及黏附兩種狀態(tài)下的表達情況;在骨髓瘤細胞中干擾DTX3L的表達,鈣黃綠素實... 

【文章來源】：南通大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DTX3L在多發(fā)性骨髓瘤細胞增殖過程中的表達

南通大學碩士學位論文3.1.2 多發(fā)性骨髓瘤細胞增殖過程中細胞周期的改變?yōu)榱诉M一步驗證DTX3L是否參與骨髓瘤細胞增殖的過程，通過對上述圖1中的各個時間點的細胞進行細胞流式周期檢測，分析多發(fā)性骨髓瘤細胞增殖過程中細胞周期的改變。如圖2所示，RPMI 8226細胞用RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)72h后，導致細胞在G1期阻滯。用完全培養(yǎng)液培養(yǎng)骨髓瘤細胞后，細胞從G1期重新進入S期。G1期的減少及S期的增加與圖1中PCNA，CDK2及cyclinE表達的改變相一致。結(jié)合圖1與圖2的實驗結(jié)果，DTX3L在促進MM細胞增殖中起重要作用。

DTX3L 被干擾后細胞活力的變化，同時用 Western Blot 檢測增殖相關(guān)蛋白PCNA，CDK2 及 cyclinE 表達的改變。如圖 4 所示，干擾 DTX3L 的表達后，細胞活力顯著降低，并且增殖相關(guān)蛋白 PCNA，CDK2 及 cyclinE 表達也明顯降低。上述實驗結(jié)果表明，干擾 DTX3L 的表達能抑制多發(fā)性骨髓瘤細胞的增殖。

【參考文獻】：
博士論文
[1]抑制蛋白酶體干擾骨髓瘤細胞未折迭蛋白反應與自噬[D]. 高瑛.第四軍醫(yī)大學 2009



本文編號：3562994