長鏈非編碼RNA XLOC 0 00647在胰腺癌進展及侵襲中的作用與機制研究
發(fā)布時間：2022-01-01 08:56
背景長鏈非編碼RNAs（long non-coding RNAs,lncRNAs）在包括胰腺癌（pancreatic cancer,PC）在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮重要作用。近年研究表明lncRNAs可通過順式調(diào)控作用的方式調(diào)控其附近基因的表達。本研究前期首先通過胰腺癌及癌旁組織lncRNAs芯片鑒定了一個在胰腺癌中低表達的新的lncRNA XLOC000647（簡稱為XLOC000647）,但目前關(guān)于XLOC000647在胰腺癌中的表達及其功能仍不清楚。方法實時定量PCR檢測XLOC000647及其附近基因NLRP3（NOD-like receptor family pyrin domain-containing 3,NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3,即NLRP3炎性小體）在胰腺癌組織及細胞中的表達水平。Transwell實驗檢測胰腺癌細胞的遷移和侵襲能力。Western blot實驗檢測胰腺癌細胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT...
【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】：96 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
胰腺癌組織和癌旁組織中差異表達lncRNAs的鑒定
log10(0.05)；上調(diào)基因：2074 個；下調(diào)基因：2693 個；無差別基因：7220 個。B 差異 lncRNAs聚類分析的熱圖。左側(cè) 3 例：癌旁組織（N）；右側(cè) 3 例：癌組織（Ca）。可見我們的目的基因 XLOC_000647 在胰腺癌組織中明顯低表達�？紤]到芯片檢測的高敏感性以及所用樣本的數(shù)量限制，我們進一步收集了48 例胰腺癌患者手術(shù)切除的癌組織及癌旁組織樣本，采用實時熒光定量 PCR 技術(shù)檢測了 XLOC_000647 的表達水平，結(jié)果顯示 XLOC_000647 在胰腺癌組織中的表達水平明顯低于癌旁組織，與芯片分析結(jié)果一致（圖 2A）。這表明，XLOC_000647 在胰腺癌中很可能是一個發(fā)揮抑癌基因功能的關(guān)鍵基因。此外，我們檢測了 XLOC_000647 在人胰腺癌細胞株（PANC-1、MIA-PaCa-2、BxPC-3）及人正常胰腺導(dǎo)管上皮細胞（HPDE6）中的表達，結(jié)果顯示 XLOC_000647 在胰腺癌細胞系中的表達水平明顯低于 HPDE6，且 XLOC_000647 在 MIA-PaCa-2 和BxPC-3 細胞株中的表達下調(diào)最顯著（圖 2B），因此我們采用 MIA-PaCa-2 和BxPC-3 兩株細胞系進行后續(xù)功能研究。
圖 3 XLOC_000647 的表達水平與胰腺癌患者的臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。AXLOC_000647 在不同 TNM 分期胰腺癌患者中的表達水平。TNM I 期：n=19；TNM II 期：n=18；TNM III 期：n=11。B XLOC_000647 在不同程度淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胰腺癌患者中的表達水平。N0（無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）：n=23；N1（區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 1-3 枚）：n=16；N2（區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4 枚）：n=9。qRT-PCR 數(shù)據(jù)以倍數(shù)變化（2-ΔΔCt）表示。C 胰腺癌患者的生存曲線。根據(jù) XLOC_000647 的表達水平將胰腺癌患者分為高表達組（中位生存期 17.0±2.1）和低表達組（中位生存期 11.0±5.6），對數(shù)秩檢驗（log-rank test，two-sided）進行統(tǒng)計學(xué)分析。NS（not significant），*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。表 2 胰腺癌患者總生存期的單變量和多變量分析（n=48）VariablesUnivariate analysis Multivariate analysisHR 95% CI P-value HR 95% CI P-valueGenderAgeTNMⅠ vs. Ⅱ2.0630.4700.2260.706-6.0250.161-1.3670.063-0.8040.1860.1660.039*0.022*
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Roles, Functions, and Mechanisms of Long Non-coding RNAs in Cancer[J]. Yiwen Fang,Melissa J.Fullwood. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(01)
[2]Long non-coding RNA:dancing on immune stage[J]. HUANG Bo. Science China（Life Sciences）. 2014(06)
本文編號：3562042
【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】：96 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
胰腺癌組織和癌旁組織中差異表達lncRNAs的鑒定
log10(0.05)；上調(diào)基因：2074 個；下調(diào)基因：2693 個；無差別基因：7220 個。B 差異 lncRNAs聚類分析的熱圖。左側(cè) 3 例：癌旁組織（N）；右側(cè) 3 例：癌組織（Ca）。可見我們的目的基因 XLOC_000647 在胰腺癌組織中明顯低表達�？紤]到芯片檢測的高敏感性以及所用樣本的數(shù)量限制，我們進一步收集了48 例胰腺癌患者手術(shù)切除的癌組織及癌旁組織樣本，采用實時熒光定量 PCR 技術(shù)檢測了 XLOC_000647 的表達水平，結(jié)果顯示 XLOC_000647 在胰腺癌組織中的表達水平明顯低于癌旁組織，與芯片分析結(jié)果一致（圖 2A）。這表明，XLOC_000647 在胰腺癌中很可能是一個發(fā)揮抑癌基因功能的關(guān)鍵基因。此外，我們檢測了 XLOC_000647 在人胰腺癌細胞株（PANC-1、MIA-PaCa-2、BxPC-3）及人正常胰腺導(dǎo)管上皮細胞（HPDE6）中的表達，結(jié)果顯示 XLOC_000647 在胰腺癌細胞系中的表達水平明顯低于 HPDE6，且 XLOC_000647 在 MIA-PaCa-2 和BxPC-3 細胞株中的表達下調(diào)最顯著（圖 2B），因此我們采用 MIA-PaCa-2 和BxPC-3 兩株細胞系進行后續(xù)功能研究。
圖 3 XLOC_000647 的表達水平與胰腺癌患者的臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。AXLOC_000647 在不同 TNM 分期胰腺癌患者中的表達水平。TNM I 期：n=19；TNM II 期：n=18；TNM III 期：n=11。B XLOC_000647 在不同程度淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胰腺癌患者中的表達水平。N0（無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）：n=23；N1（區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 1-3 枚）：n=16；N2（區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4 枚）：n=9。qRT-PCR 數(shù)據(jù)以倍數(shù)變化（2-ΔΔCt）表示。C 胰腺癌患者的生存曲線。根據(jù) XLOC_000647 的表達水平將胰腺癌患者分為高表達組（中位生存期 17.0±2.1）和低表達組（中位生存期 11.0±5.6），對數(shù)秩檢驗（log-rank test，two-sided）進行統(tǒng)計學(xué)分析。NS（not significant），*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。表 2 胰腺癌患者總生存期的單變量和多變量分析（n=48）VariablesUnivariate analysis Multivariate analysisHR 95% CI P-value HR 95% CI P-valueGenderAgeTNMⅠ vs. Ⅱ2.0630.4700.2260.706-6.0250.161-1.3670.063-0.8040.1860.1660.039*0.022*
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Roles, Functions, and Mechanisms of Long Non-coding RNAs in Cancer[J]. Yiwen Fang,Melissa J.Fullwood. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(01)
[2]Long non-coding RNA:dancing on immune stage[J]. HUANG Bo. Science China（Life Sciences）. 2014(06)
本文編號：3562042
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