發(fā)布時間：2021-12-28 11:12

　　結(jié)腸癌（Colon cancer）是世界上最常見的癌癥之一。目前結(jié)腸癌治療的主要方案是外科手術(shù)聯(lián)用放化療,然而仍有較多的患者術(shù)后出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此,探尋行之有效的治愈結(jié)腸癌的方法迫在眉睫。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤中存在數(shù)量極少但生命力極強,具有自我更新以及無限分化潛能的腫瘤干細(xì)胞（Cancer stem cells,CSCs）,參與腫瘤發(fā)生,轉(zhuǎn)移和對傳統(tǒng)放化療的治療抵抗。因此,靶向殺死腫瘤干細(xì)胞,或許是最終根治結(jié)腸癌的關(guān)鍵。現(xiàn)有的靶向腫瘤干細(xì)胞的實驗研究包括手術(shù)及放化療、免疫治療、分化治療、基于表觀遺傳特點、轉(zhuǎn)運蛋白、細(xì)胞表面標(biāo)記、信號通路、干細(xì)胞低氧微環(huán)境以及非編碼RNA（Non-coding RNA,ncRNA）等的治療,但臨床尚無靶向腫瘤干細(xì)胞的診療方案,腫瘤干細(xì)胞真正走入臨床依然舉步維艱,一是其與普通干細(xì)胞的高度相似性;二是目前的靶向研究依舊停留于動物實驗;三是腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物迄今尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn);四是由于數(shù)量極少,殺傷腫瘤干細(xì)胞后并不會出現(xiàn)明顯的腫瘤縮小等直觀反映。因此,急需研發(fā)靶向腫瘤干細(xì)胞的新型藥物,然而由于新藥研發(fā)周期長、成本高、成功率較低,所以重新定位現(xiàn)有藥物,“老藥新用... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 結(jié)腸癌的簡介
    1.2 腫瘤干細(xì)胞
        1.2.1 腫瘤干細(xì)胞及生物學(xué)特性
        1.2.2 腫瘤干細(xì)胞的分離
        1.2.3 腫瘤干細(xì)胞的鑒定
        1.2.4 腫瘤干細(xì)胞的治療
    1.3 阿托伐醌
        1.3.1 阿托伐醌的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
        1.3.2 阿托伐醌的藥理機制
        1.3.3 阿托伐醌的研究進展
        1.3.4 阿托伐醌臨床前景
    1.4 實驗立題依據(jù)
第2章 材料與試劑
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 Real-timePCR所用引物
    2.2 主要試劑配制
        2.2.1 磷酸鹽緩沖液(PBS)的配制(10×)
        2.2.2 0.25 %胰酶-EDTA混合液配制(10×)
        2.2.3 bFGF或EGF因子的配制
        2.2.4 DMEM/F12培養(yǎng)液配制
        2.2.5 磁珠分選所用Buffer的配制
        2.2.6 磁珠分選用DNaseI的配制
        2.2.7 ATO儲備液的配制
第3章 實驗方法
    3.1 結(jié)腸癌干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
        3.1.1 免疫磁珠法篩選EpCAM~+CD44~+HCT-116干細(xì)胞
        3.1.2 EpCAM~+CD44~+HCT-116細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.1.3 EpCAM~+CD44~+HCT-116細(xì)胞的鑒定
    3.2 ATO對結(jié)腸癌細(xì)胞和結(jié)腸癌干細(xì)胞增殖的影響
        3.2.1 ATO對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖的影響
        3.2.2 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞EpCAM~+CD44~+HCT-116增殖的影響
    3.3 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞凋亡的影響
        3.3.1 AnnexinV-FITC/PI法檢測細(xì)胞凋亡
        3.3.2 線粒體膜電位檢測(JC-1)
        3.3.3 Real-timePCR檢測凋亡相關(guān)基因的表達(dá)
    3.4 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞侵襲能力的影響
        3.4.1 Tanswell小室檢測細(xì)胞侵襲能力
        3.4.2 Real-timePCR檢測侵襲相關(guān)基因的表達(dá)
    3.5 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞周期的影響
    3.6 統(tǒng)計學(xué)分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 結(jié)腸癌干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
        4.1.1 EpCAM~+CD44~+HCT-116細(xì)胞的篩選
        4.1.2 EpCAM~+CD44~+HCT-116細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.1.3 EpCAM~+CD44~+HCT-116細(xì)胞的鑒定
    4.2 ATO對結(jié)腸癌細(xì)胞和結(jié)腸癌干細(xì)胞增殖的影響
        4.2.1 ATO對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖的影響
        4.2.2 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞EpCAM~+CD44~+HCT-116增殖的影響
    4.3 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.1 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
        4.3.2 線粒體膜電位法(JC-1)檢測細(xì)胞凋亡
        4.3.3 Real-timePCR檢測凋亡相關(guān)基因的表達(dá)
    4.4 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞侵襲能力的影響
        4.4.1 Tanswell小室檢測細(xì)胞侵襲能力
        4.4.2 Real-timePCR檢測侵襲相關(guān)基因的表達(dá)
    4.5 ATO對結(jié)腸癌干細(xì)胞周期的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及攻讀學(xué)位期間發(fā)表研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]阿托伐醌類似物的設(shè)計、合成及其抗腫瘤活性研究[D]. 朱侃.南京師范大學(xué) 2011



本文編號：3553957