目的:探討PI3激酶在KIT二次突變介導(dǎo)的胃腸間質(zhì)瘤靶向治療耐藥中的作用。方法:通過(guò)點(diǎn)突變?cè)谀孓D(zhuǎn)錄病毒載體上構(gòu)建胃腸間質(zhì)瘤中常見(jiàn)的KIT一次突變和二次突變的表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞,然后用包裝細(xì)胞分泌的病毒感染BaF3細(xì)胞建立穩(wěn)定表達(dá)KIT的細(xì)胞系。用PI3激酶抑制劑以及KIT抑制劑干預(yù)KIT表達(dá)細(xì)胞,檢測(cè)KIT及其下游信號(hào)通路的活化�；罴�(xì)胞計(jì)數(shù)法和凋亡細(xì)胞檢測(cè)試劑盒檢測(cè)KIT表達(dá)細(xì)胞在抑制劑干預(yù)下的增殖和存活,以闡明PI3激酶在KIT二次突變介導(dǎo)的靶向治療耐藥中的作用。結(jié)果:1.KIT二次突變顯著增強(qiáng)了其自身的活化;2.PI3激酶與KIT的結(jié)合對(duì)KIT二次突變的自活化起關(guān)鍵作用,并且該作用不被PI3激酶抑制劑所抑制;3.在失去與PI3激酶的結(jié)合后,KIT二次突變的活化對(duì)胃腸間質(zhì)瘤靶向治療藥物伊馬替尼的敏感性顯著增加;4.在失去與PI3激酶的結(jié)合后,KIT二次突變介導(dǎo)的細(xì)胞增殖和存活被伊馬替尼抑制。結(jié)論:1.PI3激酶在耐藥性胃腸間質(zhì)瘤攜帶的KIT二次突變的活化及其介導(dǎo)的細(xì)胞存活和增殖、以及對(duì)靶向藥物伊馬替尼的反應(yīng)性起關(guān)鍵作用;2.PI3激酶可能成為治療耐藥性胃腸間質(zhì)瘤良好的靶點(diǎn)。 

【文章來(lái)源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

將穩(wěn)定表達(dá)的KIT突變的BaF3細(xì)胞洗滌，并在RPMI1640培養(yǎng)基中饑餓4小時(shí)，然后用100ng/mlSCF刺激2分鐘，將KitC1用于從細(xì)胞裂解物中沉淀出KIT，然后通過(guò)SDS-PAGE分離

對(duì)照組 6 0.010±0.021 0.042±0.051 0.131±0.071 1.844±0.148 1.285±0.253 0.733±0.180干預(yù)組 6 1.000±0.000 0.860±0.184 0.500±0.043 1.772±0.363 1.957±0.497 0.935±0.201表 2-2 PI3 激酶與 KIT 二次突變的關(guān)系（X ±S）突變 組數(shù)A502Y503dup/N822KA502Y503dup/N822KA502Y503dup/N822K/M724A對(duì)照組 3 1.178±0.064 0.850±0.127 0.474±0.068干預(yù)組 3 1.000±0.000 1.163±0.042 0.693±0.245

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文結(jié)果23圖6洗滌穩(wěn)定表達(dá)KIT突變體的BaF3細(xì)胞，在PI3激酶抑制劑Copanlisib（50nM）存在的情況下，在RPMI1640培養(yǎng)基中加入不同濃度的Imatinib饑餓4小時(shí)。然后使用KitC1從細(xì)胞裂解物中沉淀出KIT。pY抗體4G10和KitC1用于檢測(cè)KIT激活。量化并計(jì)算信號(hào)強(qiáng)度以顯示相對(duì)KIT激活，P<0.05。我們分別用不同濃度的伊馬替尼和PI3激酶抑制劑Copanlisib處理表達(dá)KIT二次突變A502_Y503dup/V65A和A502_Y503dup/N822K的兩個(gè)細(xì)胞系，通過(guò)檢測(cè)KIT的活化說(shuō)明：隨著伊馬替尼藥物濃度的升高，KIT二次突變的活化水平逐漸下降，而PI3激酶抑制劑Copanlisib對(duì)KIT二次突變的活化沒(méi)有影響，說(shuō)明PI3激酶抑制劑不能抑制KIT二次突變的活化。1.5Imatinib與PI3激酶抑制劑對(duì)KIT二次突變沒(méi)有協(xié)同抑制作用

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Management of early asymptomatic gastrointestinal stromal tumors of the stomach[J]. Hans Scherübl,Siegbert Faiss,Wolfram-Trudo Knoefel,Eva Wardelmann.  World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 2014(07)



本文編號(hào)：3546149