目的:研究天然小分子化合物N-trans-feruloyloctopamine（FO）對(duì)人肝癌細(xì)胞系Huh7和HCCLM3細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響,探討FO抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用靶點(diǎn)及調(diào)控的關(guān)鍵機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)肝癌Huh7和HCCLM3細(xì)胞,采用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度FO對(duì)人肝癌細(xì)胞Huh7和HCCLM3增殖能力的抑制作用,確定IC50;采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)觀察FO對(duì)Huh7和HCCLM3細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響;通過(guò)Western Blot檢測(cè)FO干預(yù)后Huh7和HCCLM3細(xì)胞中AKT、p38 MAPK、ERK1/2、p65的表達(dá)水平的影響,并進(jìn)一步分析FO對(duì)人肝癌細(xì)胞EMT通路中關(guān)鍵蛋白Slug、Snail、N-cadherin、E-cadherin表達(dá)水平變化。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FO干預(yù)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;利用RNA-seq技術(shù)篩選FO干預(yù)后肝癌細(xì)胞中的差異基因,用DAVID生物信息學(xué)工具對(duì)差異基因進(jìn)行GO和KEGG富集分析,進(jìn)一步明確差異基因調(diào)節(jié)的功能和信號(hào)通路,結(jié)合GO和KEGG分析數(shù)據(jù),篩選出FO調(diào)節(jié)的潛在靶基因。結(jié)果:1.細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn):不同濃... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

FO的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文香蘭素衍生物通過(guò)PI3K-AKT、Apoptosis通路對(duì)人肝癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響的研究161.2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS15.0、GraphpadPrism5.01進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各實(shí)驗(yàn)都進(jìn)行三次重復(fù)驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)內(nèi)設(shè)置復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行獨(dú)立t檢驗(yàn)和差異性分析，p＜0.05視為具有差異性，p＜0.01視為顯著差異。1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.3.1FO的藥效及IC50的測(cè)定為了檢驗(yàn)FO對(duì)肝癌細(xì)胞的藥效，我們采用了細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了FO對(duì)Huh7和HCCLM3細(xì)胞活力的影響。用不同濃度FO（0mΜ、0.1mΜ、0.5mΜ、1mΜ、2mΜ、4mΜ、10mΜ、20mΜ、50mΜ）分別干預(yù)肝癌細(xì)胞48h。結(jié)果如圖1-3-1所示，我們發(fā)現(xiàn)FO以濃度依賴(lài)性的方式抑制肝癌細(xì)胞增殖，F(xiàn)O濃度越高肝癌細(xì)胞活性就越低。通過(guò)細(xì)胞存活率的計(jì)算，我們得到了FO在肝癌細(xì)胞Huh7和HCCLM3的半抑制濃度分別為：2.00mM、2.27mM;圖1-3-1驗(yàn)證不同濃度FO（0mΜ、0.1mΜ、0.5mΜ、1mΜ、2mΜ、4mΜ、10mΜ、20mΜ、50mΜ）對(duì)肝癌細(xì)胞Huh7和HCCLM3干預(yù)48h后，對(duì)細(xì)胞活力的影響(此實(shí)驗(yàn)用5-Fu作為對(duì)照，檢測(cè)FO的藥效)1.3.2FO對(duì)人肝癌細(xì)胞增殖能力的影響根據(jù)CCK-8實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果，我們選定了FO的IC50濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度。我們分別對(duì)Huh7和HCCLM3進(jìn)行FO（2.00mM、2.27mM）干預(yù)不同時(shí)間（24h、48h、72h）。結(jié)果如圖1-3-2所示，與對(duì)照組相比，F(xiàn)O處理組Huh7和HCCLM3細(xì)胞的增殖明顯受到抑制，且作用時(shí)間越長(zhǎng)，抑制越明顯。

-2FO對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力的影響

【參考文獻(xiàn)】：
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