發(fā)布時(shí)間：2021-11-29 10:20

　　研究背景肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是非常普遍和病死率極高的惡性腫瘤,位居我國惡性腫瘤死亡率第二位,嚴(yán)重危害人民健康。流行病學(xué)研究表明慢乙肝病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素,其次酗酒、黃曲霉素食品污染都和肝癌密切聯(lián)系。分子生物學(xué)研究表明肝癌發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是一個(gè)多步驟多因素過程,涉及細(xì)胞內(nèi)一系列復(fù)雜變化,其中腫瘤血管生成起重要作用。此外,肝癌的發(fā)病隱匿,不易早期診斷,等患者出現(xiàn)典型癥狀往往已經(jīng)發(fā)展到肝癌中晚期,失去了有效治療時(shí)間。最近研究表明,目前肝癌首選治療方法仍是手術(shù),但即使早期手術(shù)切除的小肝癌,5年內(nèi)仍有50%左右的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率。因肝癌的發(fā)生發(fā)展是多因素共同參與,臨床上治療肝癌的許多藥物作用機(jī)制靶向性過強(qiáng),僅僅針對(duì)肝癌發(fā)生機(jī)制中某一因素,適應(yīng)人群偏少,且患者極易出現(xiàn)耐藥和不同程度毒副反應(yīng),總體上不能獲得理想治療效果。因此,研發(fā)新的抗肝癌藥物,對(duì)我國這樣一個(gè)肝癌高發(fā)國家而言,有著極其重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。組織蛋白酶是一類在酸性PH環(huán)境中被活化的溶酶體蛋白酶,屬于半胱氨酸蛋白酶,在人類基因組中,11種不同... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：180 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 CTSS表達(dá)水平與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的關(guān)系
    1. 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 結(jié)果
        2.1 RT-PCR檢測(cè)CTSS基因在不同肝細(xì)胞系中的表達(dá)
        2.2 不同肝癌細(xì)胞系CTSS蛋白水平表達(dá)
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 慢病毒介導(dǎo)的shRNA-CTSS細(xì)胞株的建立
    1 材料及試劑
        1.1 細(xì)胞
        1.2 主要試劑和試劑盒
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 主要溶液配制
        1.5 所用引物
        1.6 質(zhì)粒和菌株
    2 方法
        2.1 培養(yǎng)293FT細(xì)胞
        2.2 293FT細(xì)胞凍存、復(fù)蘇
        2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.4 pMagic 8.1干擾質(zhì)粒功能檢測(cè)
        2.5 pMagic 8.1慢病毒載體的包裝
        2.6 病毒感染MHCC97-H細(xì)胞制備穩(wěn)定株
    3. 結(jié)果
        3.1 質(zhì)粒鑒定
        3.2 慢病毒包裝
        3.3 Western Blot檢測(cè)慢病毒感染的MHCC97-H細(xì)胞中CTSS蛋白的表達(dá)情況
    4. 討論
    5. 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三部分 shCTSS對(duì)MHCC97-H細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 結(jié)果
    3 討論
    4.小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四部分 蜂毒素抑制CTSS調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 結(jié)果
        2.1 蜂毒素抑制穩(wěn)定株細(xì)胞增殖活力
        2.2 蜂毒素抑制穩(wěn)定株細(xì)胞克隆形成
        2.3 劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室趨化實(shí)驗(yàn)觀察蜂毒素對(duì)穩(wěn)定株運(yùn)動(dòng)能力的影響
        2.4 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蜂毒素對(duì)VEGF分泌的影響
        2.5 觀察蜂毒素對(duì)HUVECs的影響作用
        2.6 蜂毒素對(duì)不同侵襲能力肝癌細(xì)胞CTSS調(diào)控的作用
        2.7 蜂毒素抑制穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MHCC97-H細(xì)胞CTSS、VEGF-A、p-VEGFR2、p-Ras、p-Raf,p-MEK1和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五部分 蜂毒素在體內(nèi)調(diào)控C T S S蛋白表達(dá)和VEGF-A/VEGFR2/MEK1/ERK1/2通路抑制肝癌細(xì)胞生長和血管形成
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2.結(jié)果
        2.1 鼠模型大體觀察
        2.2 裸鼠肝移植瘤的體積和重量
        2.3 CD34在裸鼠移植瘤組織中的表達(dá)情況
        2.4 蜂毒素抑制原位移植人肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移裸鼠模型肝原位移植瘤中CTSS和VEGF-A/VEGFR2/MEK1/ERK1/2通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
本研究中的局限性和展望
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表論文及研究成果



本文編號(hào)：3526332