乳腺癌是女性排名第一的惡性腫瘤,乳腺癌的早期診斷和治療對增長患者生存期具有重要意義。乳腺癌患者的外周血中除了特殊蛋白、核酸等常規(guī)的血清標志物外,還存在一些微尺度的納米囊泡,研究發(fā)現(xiàn),這些納米囊泡可作為乳腺癌早期診斷的生物標志物。外泌體是脂質(zhì)包封的納米級囊泡中的一種,腫瘤來源的外泌體包含很多癌蛋白、mRNA等腫瘤特異性分子標志物,外泌體可以充當細胞間的分子信使,參與腫瘤細胞和微環(huán)境之間的信號傳導。此外,由于腫瘤細胞表面外泌體分泌旺盛,且可以從體液中分離出來,因此,在液體活檢中,外泌體被認為是一種重要的生物標志物,在癌癥的診斷、預后和治療等方面擁有巨大的潛力。到目前為止,關于外泌體檢測的研究已經(jīng)有很多報道,但是方便、低成本的檢測方法還亟待開發(fā)�；诖�,我們提出了兩種省時低耗的外泌體檢測方法,一種是利用G-四鏈體DNA過氧化物模擬酶實現(xiàn)高靈敏度的外泌體檢測;第二種方法以不規(guī)則的四面體DNA結(jié)構(gòu)為支架,串聯(lián)天然酶與人工酶（G-四鏈體）,通過酶級聯(lián)信號放大實現(xiàn)外泌體檢測。本論文的主要研究內(nèi)容如下:1、基于氯化血紅素（hemin）/G-四鏈體模擬辣根過氧化物酶（HRP）的優(yōu)越性,我們將高特異性的m... 

【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?１外泌體的結(jié)構(gòu)與組分??Ｆｉｇ．?１．１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??

開發(fā)了很多檢測方法。傳統(tǒng)的檢測技術主要包括納米顆??粒跟蹤分析（ＮＴＡ）、動態(tài)光散射（ＤＬＳ）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ＥＬＩＳＡ）和流式細胞術等。??１．３．１傳統(tǒng)定量方法??１．３丄１?透射電鏡（ＴＥＭ）??外泌體的大小和結(jié)構(gòu)可以用通過電子顯微鏡來鑒定。在生物材料的傳統(tǒng)電子顯微鏡??中，樣品制備需要固定、脫水和金屬化。樣品制備可能會導致樣品的損傷（例如，囊泡??可能會瓦解），導致杯狀的形貌，而低溫電子顯微鏡顯示出完美的特殊結(jié)構(gòu)［１３］，有趣的??是，在二氧化硅納米粒子上捕獲的外泌體（圖１．２Ａ），在沒有低溫固定的情況下仍然保持??球形［４６］，應用免疫金顆�？梢詸z測到表面生物標志物的存在［４７］。圖１．２Ｂ顯示了與外泌??體和杯狀外泌體膜上的Ｒａｂ５蛋白標記物結(jié)合的金納米顆粒的定位，其大小在３０－３００?ｎｍ??范圍內(nèi)［４８１，外泌體簇的尺寸為３００?ｎｍ。而計算異質(zhì)樣品中外泌體的數(shù)量，需要大量的??圖像進行評估，這也代表了電子顯微鏡的實際局限性［４９１。??圖１．２外泌體的ＴＥＭ圖像（Ａ）捕獲的外泌體經(jīng)ｐＨ為７．１磷鎢酸陰性染色后的ＴＥＭ圖像（Ｂ）??外切結(jié)合外泌體的免疫特性??Ｆｉｇ．?１．２?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ?（Ａ）?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ｃａｐｔｕｒｅｄ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ?ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ?ｎｅｇａｔｉｖｅ??ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｐＨ?７．１?ｐｈｏｓｐｈｏｔｕｎｇｓｔｉｃ?ａｃｉｄ?（Ｂ）?ｉｍｍｕｎｏｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｘｏＣｈｉｐ－ｂｏｕｎｄｅｄ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??

第８頁?華東理工大學碩士學位論文??流式細胞術以流式細胞儀為依托，是一種分析細胞表面和細胞內(nèi)分子（蛋白）表達的??技術６１：，可以測量外泌體的多種表面標記物。簡單地說，懸浮在液體中的單分散細胞通??過激光束的路徑，每個單元將光偏轉(zhuǎn)到正向（正向散射）或側(cè)向（側(cè)向散射）。探測到的散??射光被轉(zhuǎn)換成與其強度成正比的電壓脈沖。通過超速離心法，從骨髓樹狀的細胞（ＢＭＤＣ）??提取的外泌體（ＢＭＤＣｓ）通過被動吸附被涂布到４?ｊａＭ醛／硫酸乳膠珠上。標記兩種不同??熒光的外泌體與抗體進行孵育，圖１．３中展示了流式細胞儀的觀察結(jié)果。與其他技術相??比，流式細胞術的主要優(yōu)點是可以測量每個外泌體相關的單個或多個表面標記物。??＾?ＡＰＣ－ＬＡＭＰ－１?ａｎｄ??４?ＵｎＳｌａ＇ｎｅｄ?，?ＦＩＴＣ－ＭＨＣ－ＩＩ??個?１０?４０．００?０＾７］?１〇＇?Ｊ１５．４８?６＾６??１０３?￣?１〇３－?．??１０２?ｎ?１０２＂１??ｌ???＾?１０。冬＂和?Ｕ．１?■?＂ｎ??１０°?１〇＇?１〇２?１〇３?１〇４?１０°?１０１?１０２?１０３?１０４??ＦＬ１?？??圖１．３抗體標記的－ＢＭＤＣ－外泌體的流式細胞術檢測結(jié)果??Ｆｉｇ．?１．３?Ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ｒｅｓｕｌｔ?ｆｏｒ?ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌａｂｅｌｅｄ－ＢＭＤＣ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??１．３．２夕卜泌體定量新技術??為了提高外泌體檢測的靈敏度、速度和效率，研究人員試圖建立新的生物傳感器用??于檢測外泌體，如表面等離子體共振（ＳＰＲ）、表面增強拉曼散射（ＳＥＲＳ）、熒光、電化??學和紫外分光光譜學等檢測器。儀器的簡易性和生物傳感器的普及性使

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Exosomes as therapeutic drug carriers and delivery vehicles across biological membranes:current perspectives and future challenges[J]. Dinh Ha,Ningning Yang,Venkatareddy Nadithe.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2016(04)



本文編號：3522146