發(fā)布時間：2021-11-24 02:36

　　目的:食管癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一,中國是食管癌的高發(fā)區(qū),放療是食管癌標準治療方法之一,但放射抗性始終是限制放療療效提升的重要瓶頸。我們前期研究發(fā)現(xiàn)NRAGE可能通過Wnt/β-catenin信號通路參與食管鱗癌放射抗性的形成。但這些研究都是建立在2D平面培養(yǎng),無法真實模擬人體內(nèi)腫瘤生長的微環(huán)境。3D細胞培養(yǎng)是一種模擬體內(nèi)組織細胞立體生長的體外細胞培養(yǎng)技術(shù),然而目前對于應(yīng)用3D生物打印技術(shù)構(gòu)建食管癌細胞模型的研究尚無報道。本研究借助3D細胞打印技術(shù),以明膠、海藻酸鈉和食管癌細胞混合物為打印材料,構(gòu)建了可模擬體內(nèi)腫瘤微環(huán)境的3D食管癌細胞模型,并與2D平面培養(yǎng)細胞模型比較,檢測兩種模式下,食管癌細胞增殖的情況。在兩種培養(yǎng)模式下,研究過表達NRAGE對食管癌細胞增殖和放射抗性的作用。方法:1. 利用3D細胞打印技術(shù),將人食管癌細胞/明膠/海藻酸鈉構(gòu)建3D食管癌細胞模型。2. 采用鈣黃綠素-AM和碘化丙啶溶液對3D食管癌細胞模型進行活/死細胞雙熒光染色,評價打印后細胞的存活率。3.顯微鏡下觀察打印后1,7,14天的模型結(jié)構(gòu),并通過HE染色觀察打印后7,14,21天3D食管癌細胞模型的細... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞模型（a為3D細胞模型示意圖；b為3D細胞模型外觀）

18B圖23D食管癌細胞支架Eca109與Eca109/NRAGE細胞的存活率Fig.2SurvivalrateofEca109andEca109/NRAGEcellsinthree-dimensionalesophagealmodelby3Dprinting(*P<0.05)3.3D食管癌細胞模型的形態(tài)倒置顯微鏡觀察3D食管癌細胞支架形態(tài)，連續(xù)觀察21天。結(jié)果顯示：打印后第1天，兩種3D細胞支架呈多層網(wǎng)格狀，腫瘤細胞多分布在支架內(nèi)部，且分布均勻，如圖3a，圖3d；隨著培養(yǎng)時間延長，一周后細胞呈球形生長，如圖3b，圖3e；培養(yǎng)14天之后，球形向支架邊緣生長并發(fā)生了脫落現(xiàn)象，如圖3c，圖3f；在培養(yǎng)期間，天然明膠在培養(yǎng)基中通過水解逐漸降解，為腫瘤細胞的成團生長提供了空間，尤其是Eca109/NRAGE組這一現(xiàn)象更明顯，如圖3c，3f。為了深入觀察3D腫瘤細胞模型中的具體形態(tài)，進一步做了HE染色。結(jié)果顯示：培養(yǎng)第7天，細胞成團生長，且均勻分布在模型中，兩組細胞團中的細胞核較大，不規(guī)則，胞漿比例失調(diào)，且相對于親本細胞Eca109，過表達NRAGE的Eca109/NRAGE細胞有明顯的成團增長的趨勢；培養(yǎng)第14天和第21天，細胞團塊繼續(xù)增殖變大，同時形成了簡單的立體結(jié)構(gòu)，如圖4。

19圖3光學(xué)顯微鏡下觀察3D食管癌模型Eca109與Eca109/NRAGE細胞形態(tài)(a-c:Eca109組在第1,7,14天的形態(tài),d-f:Eca109/NRAGE組第1,7,14天的形態(tài))(100×)Fig.3MorphologyofesophagealcarcinomacellEca109andEca109/NRAGEinthree-dimensionalcellmodelunderopticalmicroscope(a-c:morphologyofEca109groupon1st,7thand14thday;d-f:morphologyofEca109/NRAGEgroupon1st,7thand14thdayunderopticalmicroscope)(100×)圖4HE染色觀察3D食管癌細胞模型Eca109和Eca109/NRAGE組第7,14和21天的形態(tài)(100×)Fig.4H&EstainingofEca109andEca109/NRAGEcellsinthree-dimensionalmodelat7th,14th,21stday(100×)4.掃描電鏡下觀察結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]NRAGE基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染食管癌細胞系的建立及其放射抗性機制研究[D]. 楊玉.河北醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]基于細胞3D打印技術(shù)的腫瘤藥物篩選細胞芯片研究[D]. 趙占盈.杭州電子科技大學(xué) 2014
[4]可降解海藻酸鹽水凝膠的研究[D]. 何淑蘭.天津大學(xué) 2005



本文編號：3515094