目的:胃癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一,其死亡率位于惡性腫瘤第二位。雖然胃癌治療方式有一定進(jìn)展,但治愈率并沒有得到相應(yīng)的提高。因此尋找新的治療靶點(diǎn)具有重要的臨床意義。日益增多的研究表明miRNAs參與了癌細(xì)胞增殖、分化、凋亡及侵襲等過程,且miRNAs可因被包裹于外泌體中而在體液中穩(wěn)定存在。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)在胃癌患者血清中miR-27a,miR-20、miR-34a、miR-1和miR-423-5p呈穩(wěn)定的高表達(dá)狀態(tài),進(jìn)一步收集病例資料發(fā)現(xiàn)miR-27a高表達(dá)的患者預(yù)后不良,提示miR-27a可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。目前,miR-27a對(duì)胃癌的具體作用及機(jī)制尚不清楚。本研究旨在前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上探索miR-27a在胃癌細(xì)胞外泌體中表達(dá)情況,研究miR-27a對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為影響及機(jī)制,以期尋找到胃癌治療新途徑。方法:1.miR-27a在胃癌細(xì)胞外泌體中表達(dá)情況:Exoquick TC法收集胃癌細(xì)胞SGC-7901培養(yǎng)上清中的外泌體,通過透射電鏡及Western blotting觀察所收集的外泌體形態(tài)及其標(biāo)志物,BCA-kit檢測外泌體中蛋白濃度。實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

透射電鏡觀察到囊泡狀的外泌體

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果結(jié)果1 胃癌細(xì)胞外泌體中 miR-27a 的表達(dá)透射電鏡下觀察 SGC-7901 外泌體為橢圓形或圓形的囊泡狀小體，直徑約30-100nm， Western blotting 檢測 SGC-7901 細(xì)胞上清中外泌體標(biāo)志物 CD63 高表達(dá)，BCA-kit 檢測外泌體中蛋白濃度為 0.6ug/ul，與 PBS 中蛋白濃度差異顯著。實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (Realtime PCR)檢測收集的外泌體中 5 種 miRNA 的表達(dá)水平，結(jié)果顯示 miR-27a, miR-20 和 miR-34a 表達(dá)量較高, 而 miR-1 和 miR-423-5p表達(dá)量較低，且 miR-27a 表達(dá)隨著外泌體濃度升高而升高，表明胃癌細(xì)胞外泌體中 miR-27a 高表達(dá)（圖 1）。Exosome PBS

圖 1 胃癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體提取、鑒定及 miR-27a 在胃癌細(xì)胞外泌體中表達(dá)情況2 miR-27a 過表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響CCK-8 法檢測結(jié)果顯示，上調(diào) SGC-7901 細(xì)胞 miR-27a 后的細(xì)較對(duì)照組加快( P＜0.05)。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，與 NC 組相比較mimics 轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后可顯著抑制 SGC-7901 細(xì)胞凋亡（P<0.05）。上組凋亡相關(guān)蛋白 p53 水平下降，BCL-2 表達(dá)上調(diào)，自噬相關(guān)蛋白 L表達(dá)下降（P<0.05）(圖 2)。miR-27aNC0.00.51.01.5SurvivalRate***圖 2.1 miR-27a 過表達(dá)促進(jìn) SGC-7901 細(xì)胞增殖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-27a下調(diào)腎癌細(xì)胞FOXO1表達(dá)并促進(jìn)其細(xì)胞增殖[J]. 周立斌,凡杰,劉勇超,張長存,尹冰德,洪艷.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2012(02)



本文編號(hào)：3512595