研究目的:1.檢測超氧化物歧化酶2（Superoxide dismutase 2,SOD2）在肺腺癌A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞中蛋白及mRNA表達(dá)水平。2.初步探討SOD2對肺腺癌A549干細(xì)胞的調(diào)控和順鉑耐藥及侵襲的影響。方法:1.用10%FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)A549細(xì)胞,無限稀釋法挑選緊密型單克隆A549細(xì)胞,用SFM培養(yǎng)基培養(yǎng)出二代A549干細(xì)胞球。2.CCK8試劑盒檢測A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞球的增殖差異,不同濃度順鉑下兩種細(xì)胞存活率變化,及A549干細(xì)胞球經(jīng)siRNA-SOD2轉(zhuǎn)染后增殖情況。3.試劑盒分別檢測不同濃度順鉑作用A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞活性氧ROS含量和SOD2濃度,以及經(jīng)siRNA-SOD2轉(zhuǎn)染A549干細(xì)胞后ROS含量變化。4.Western Blot和RT-PCR分別檢測A549細(xì)胞及A549干細(xì)胞球SOD2蛋白及mRNA表達(dá)水平,并檢測這兩種細(xì)胞多種轉(zhuǎn)錄因子（Bmi-1、Nanog、Sox2、Oct4）和凋亡蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase3）表達(dá)水平差異,以及A549干細(xì)胞經(jīng)不同濃度順鉑作用下SOD2、Bax、Bcl-2、Caspase3... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

線粒體SOD2的功能

第1章前言3于SOD2基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游50個(gè)位置，提示這些多能轉(zhuǎn)錄因子可能在干細(xì)胞樣狀態(tài)下調(diào)控SOD2的轉(zhuǎn)錄[23]。Oluwaseun等[24]研究發(fā)現(xiàn)，SOD2的異常表達(dá)不但增強(qiáng)了大腸癌細(xì)胞的致瘤性和腫瘤干細(xì)胞樣表型，而且還能協(xié)同增強(qiáng)氟尿嘧啶和奧沙利鉑等化療藥物的敏感性。此外，SOD2還被認(rèn)為是腫瘤的遷移和侵襲的重要因素。研究發(fā)現(xiàn)，超氧化物歧化酶2/谷胱甘肽過氧化物酶1（SOD2/GPx1）比值可以作為前列腺癌、結(jié)腸癌和肺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物[25]。SOD2在腫瘤中的過表達(dá)可以通過多種機(jī)制增強(qiáng)侵襲性和遷移能力。比如，SOD2的激活增強(qiáng)了O2的清除，以適應(yīng)與腫瘤進(jìn)展相關(guān)的壓力，并可以驅(qū)動H2O2介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，而較高濃度的H2O2有利于腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，H2O2依賴于SOD2的產(chǎn)生，通過Snai1和Slug信號通路參與了腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲（如圖2b）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，MYC原癌基因(c-myc)依賴SOD2表達(dá)的增加導(dǎo)致了舌鱗癌干細(xì)胞更多的遷移和侵襲性表型，同時(shí)增強(qiáng)了腫瘤干細(xì)胞的干性特性[26]。圖2：SOD2在腫瘤中的調(diào)控綜上所述，本課題擬探究超氧化物歧化酶2（SOD2）在A549肺腺癌干細(xì)胞中的表達(dá)水平及調(diào)控作用，并通過轉(zhuǎn)染siRNA基因沉默技術(shù)，研究SOD2在A549肺腺癌干細(xì)胞的侵襲遷移的變化以及經(jīng)順鉑干預(yù)后對細(xì)胞增殖、凋亡的影響，進(jìn)而闡明SOD2在A549肺腺癌干細(xì)胞順鉑耐藥及侵襲中的作用，以期為消除肺癌干細(xì)胞改善肺癌患者預(yù)后奠定理論基礎(chǔ)，并拓展新的干預(yù)策略。

綜述46圖1線粒體SOD2的功能圖2SOD2啟動子2.調(diào)控SOD2的分子機(jī)制SOD2的表達(dá)受到轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后及翻譯等多水平的調(diào)控。在轉(zhuǎn)錄水平，SOD2作為腫瘤抑制因子的作用通常與SOD2表達(dá)減少有關(guān)，這是通過SOD2表觀遺傳調(diào)節(jié)或抑制腫瘤相關(guān)信號來影響基礎(chǔ)和增強(qiáng)子轉(zhuǎn)錄機(jī)制。相反，SOD2的高表達(dá)通常與細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外刺激(包括與氧化還原應(yīng)激相關(guān)的刺激)的轉(zhuǎn)錄上調(diào)有關(guān)。SOD2基因包含三個(gè)主要的調(diào)控區(qū)(上游增強(qiáng)子區(qū)域、近端啟動子區(qū)域和第二內(nèi)含子增強(qiáng)子區(qū)域)，它們負(fù)責(zé)結(jié)合參與SOD2轉(zhuǎn)錄激活或抑制的轉(zhuǎn)錄因子。SOD2的兩個(gè)主要的轉(zhuǎn)錄因子Sp1和AP-2分別是激活和抑制因子，Sp1結(jié)合于啟動子激活SOD2的轉(zhuǎn)錄，而AP-2通過與Sp1競爭結(jié)合位點(diǎn)或Sp1形成復(fù)合體以抑制SOD2的轉(zhuǎn)錄。此外，上游啟動子區(qū)也有AP-1、HIF-1a、p53、C/EBP、Nrf2、FOXO3a等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，共同對SOD2的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控[3]。研究顯

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低氧對人肺腺癌A549多細(xì)胞球體上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促轉(zhuǎn)移的影響[J]. 黃學(xué)德,熊呂平,葉小群.  腫瘤. 2012(03)



本文編號：3505116