發(fā)布時間：2021-11-18 05:23

　　目的:肺癌是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。根據病理分型,肺癌可分為非小細胞肺癌（NSCLC）和小細胞肺癌（SCLC）。肺癌的發(fā)生與吸煙、職業(yè)暴露、空氣污染及肺部感染性疾病有關,但確切的機制尚不明確。因此,了解肺癌的發(fā)病機制對于疾病的早期診斷具有重要意義。研究表明在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中,肺癌細胞對于氧化應激呈現出“兩面性”,一方面在肺癌發(fā)生的早期,氧化應激可以誘導肺癌的發(fā)生,促進細胞的增殖;另一方面在肺癌的進展期,肺癌細胞則表現出很強的抗氧化應激能力,進而抵抗細胞凋亡及對化療藥物產生耐藥性。因此探討肺癌細胞對氧化應激刺激的抵抗效應有助于了解肺癌的惡性進程以及對放化療抵抗的機制。前期工作中發(fā)現,肺癌細胞高表達S100家族蛋白——S100A16,且與肺癌細胞轉移入腦后的生存活力相關。S100家族蛋白是應激蛋白,有文獻報道其參與急性及慢性炎癥應激反應,而且與諸多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。作為S100家族的一員,有關S100A16的研究是有限的,有研究表明,在乳腺癌細胞中,S100A16可以上調Notch1,ZEB1,ZEB2的表達,誘導乳腺癌細胞發(fā)生上皮細胞間質化改變,促進乳腺癌的侵襲和轉移... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同腫瘤細胞株中S100A16表達水平檢測

中國醫(yī)科大學碩士學位論文15圖3.2細胞在正常以及氧化刺激時S100A16蛋白的表達水平3.3過氧化氫刺激作用下S100A16在肺癌細胞內分布的改變前述實驗表明H2O2處理后的A549細胞和NCI-H446細胞內S100A16的表達水平明顯增高，提示其為應激反應蛋白。隨后，我們利用免疫熒光的方法在激光共聚焦顯微鏡下觀察S100A16在細胞內分布的情況。如圖3.3結果顯示，給予H2O2處理的A549細胞內S100A16由細胞質內彌散分布轉變?yōu)橄蚣毎藘雀患�，并呈現核仁區(qū)分布的現象。為進一步驗證前述現象，我們采用了細胞不同組分分離的方法，分離純化了H2O2處理前后的A549細胞及NCI-H446細胞的不同組分，即細胞質及細胞核組分，利用westernblot的方法分析不同組分中S100A16的表達情況，圖3.3（2）結果表明，給予H2O2處理后，肺癌細胞內的S100A16在細胞質中的水平減少，而在細胞核組分中含量增加，同免疫熒光的實驗結果呈現一致性。圖3.3（1）H2O2刺激后免疫熒光觀察S100A16在肺癌細胞內分布情況圖為A549細胞轉染了pEGFP-N1質粒和pEGFP-N1/S100A16質粒后72小時給與H2O2刺激，于激光共聚焦顯微鏡下觀察S100A16分布情況。

中國醫(yī)科大學碩士學位論文15圖3.2細胞在正常以及氧化刺激時S100A16蛋白的表達水平3.3過氧化氫刺激作用下S100A16在肺癌細胞內分布的改變前述實驗表明H2O2處理后的A549細胞和NCI-H446細胞內S100A16的表達水平明顯增高，提示其為應激反應蛋白。隨后，我們利用免疫熒光的方法在激光共聚焦顯微鏡下觀察S100A16在細胞內分布的情況。如圖3.3結果顯示，給予H2O2處理的A549細胞內S100A16由細胞質內彌散分布轉變?yōu)橄蚣毎藘雀患�，并呈現核仁區(qū)分布的現象。為進一步驗證前述現象，我們采用了細胞不同組分分離的方法，分離純化了H2O2處理前后的A549細胞及NCI-H446細胞的不同組分，即細胞質及細胞核組分，利用westernblot的方法分析不同組分中S100A16的表達情況，圖3.3（2）結果表明，給予H2O2處理后，肺癌細胞內的S100A16在細胞質中的水平減少，而在細胞核組分中含量增加，同免疫熒光的實驗結果呈現一致性。圖3.3（1）H2O2刺激后免疫熒光觀察S100A16在肺癌細胞內分布情況圖為A549細胞轉染了pEGFP-N1質粒和pEGFP-N1/S100A16質粒后72小時給與H2O2刺激，于激光共聚焦顯微鏡下觀察S100A16分布情況。


本文編號：3502293