目的:觀察二甲雙胍是否可以減輕順鉑導(dǎo)致的顆粒細(xì)胞損傷,探討二甲雙胍在順鉑導(dǎo)致顆粒細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。方法:1. 顆粒細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定:選取卵巢功能正常因男方因素或輸卵管因素行體外受精-胚胎移植的患者,取卵時(shí)留取卵泡液,離心分離出顆粒細(xì)胞。將顆粒細(xì)胞用含15%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定人卵巢顆粒細(xì)胞FSHR的表達(dá)。2.在體外人卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系中,加入不同濃度順鉑（2.5μg/m L、5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L）作用24小時(shí)后通過(guò)CCK8檢測(cè)方法篩選出最佳損傷濃度。分別采用不同濃度二甲雙胍（1m M、2m M、5m M、10 m M、20 m M）預(yù)先保護(hù)2小時(shí)后,加入終篩選出的最佳損傷濃度順鉑作用24小時(shí)后,通過(guò)CCK8檢測(cè)方法篩選二甲雙胍的最佳保護(hù)濃度。3.實(shí)驗(yàn)共分為3組,分別為對(duì)照組:正常培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)組:含1 m M二甲雙胍培養(yǎng)基預(yù)先處理2小時(shí),加入終濃度10μg/m L順鉑繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。模型組:含10μg/m L順鉑的培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí),4.采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定三組顆粒細(xì)胞上清液雌二... 

【文章來(lái)源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人卵巢顆粒細(xì)胞24小時(shí)培養(yǎng)(×200)

圖 1 人卵巢顆粒細(xì)胞 24 小時(shí)培養(yǎng)(×200) Fig.1 Morphology of human ovarian granulosa cells cultured for 24 hours .Magnification×200

252.免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定：圖3,4結(jié)果顯示：細(xì)胞核成藍(lán)色，胞漿成棕褐色著色，F(xiàn)SHR陽(yáng)性率高于90%。結(jié)果提示：實(shí)驗(yàn)分離培養(yǎng)細(xì)胞為人卵巢顆粒細(xì)胞。圖3人卵巢顆粒細(xì)胞陰性對(duì)照(×400)Fig.3NegativecontrolofHumanovariangranulosacells(×400)圖4人卵巢顆粒細(xì)胞FSHR免疫化學(xué)染色(×200)Fig.4ImmunocytochemistryfordetectionFSHRofHumanovariangranulosacells.Magnification×2003.順鉑濃度篩選：圖5結(jié)果顯示：不同濃度順鉑（2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL）處理24小時(shí)后顆粒細(xì)胞抑制率分別為（16.30±1.47）%、（25.50±11.53）%、（36.89±1.68）%、（52.92±1.22）%；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在給藥時(shí)間相同時(shí)，隨著順鉑濃度增加細(xì)胞抑制率也升高，且呈劑量依賴性。選擇細(xì)胞抑制率小于50%且最接近50%的濃度為10μg/mL為損傷最適濃度。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]活性氧熒光探針的設(shè)計(jì)、合成及生物成像應(yīng)用研究[D]. 張楠.濟(jì)南大學(xué) 2019
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本文編號(hào)：3501114