[目的]低劑量輻射下PI3K/AKT/p53通路對(duì)A549和XWLC-05細(xì)胞放射超敏感性、細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因、蛋白表達(dá)的影響。[方法]1、查找Genbank中wt-p53基因的序列,設(shè)計(jì)相應(yīng)引物,構(gòu)建野生型p53（wt-p53）慢病毒載體,將慢病毒載體及空載體轉(zhuǎn)染入XWLC-05和A549細(xì)胞中。2、用DNA損傷劑阿霉素培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí),熒光定量PCR和western-bloting判斷p53的表達(dá)情況和功能狀態(tài)。3、用50 μmol/L LY294002選擇性抑制劑處理培養(yǎng)XWLC-05和A549細(xì)胞24小時(shí),western-bloting檢測(cè)PI3K/AKT通路抑制情況,以PI3K下游AKT和磷酸化AKT的蛋白表示。4、以不同劑量 x 線（0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0Gy）分別照射 LY294002處理組、野生型p53轉(zhuǎn)染組以及LY294002處理+野生型p53轉(zhuǎn)染組細(xì)胞�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)看各組細(xì)胞的的存活情況,并擬合出細(xì)胞存活曲線,比較兩種細(xì)胞之間的HRS差異性。5、以部分x線（0、0.2、0.5、1.0Gy）照射LY294002處理組、野生型p53... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞轉(zhuǎn)染野生型ｐ５３基因７２小時(shí)熒光顯微鏡下觀察（１０ｘ）??２、導(dǎo)入的外源性野生型Ｐ５３基因表達(dá)情況及功能狀態(tài)：??

間ＡＫＴ的表達(dá)基本無變化，以總ＡＫＴ蛋白作為內(nèi)參照，力卩藥組ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表達(dá)明顯下降，加藥組?Ａ５４９??細(xì)胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表達(dá)也明顯下降（圖?４／５），??在同一濃度的抑制劑下ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞沒有Ａ５４９細(xì)胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??圖４加ＬＹ２９４００２抑制劑前后Ａ５４９細(xì)胞和ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞抑制ＰＩ３Ｋ情況??注：１－４?分別為?Ａ５４９?細(xì)胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?細(xì)胞，ＸＷＬＣ－０５?細(xì)胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?細(xì)胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??圖５?Ａ５４９與ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞磷酸化ＡＫＴ與總ＡＫＴ的相對(duì)水平??３７??

間ＡＫＴ的表達(dá)基本無變化，以總ＡＫＴ蛋白作為內(nèi)參照，力卩藥組ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表達(dá)明顯下降，加藥組?Ａ５４９??細(xì)胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表達(dá)也明顯下降（圖?４／５），??在同一濃度的抑制劑下ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞沒有Ａ５４９細(xì)胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??圖４加ＬＹ２９４００２抑制劑前后Ａ５４９細(xì)胞和ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞抑制ＰＩ３Ｋ情況??注：１－４?分別為?Ａ５４９?細(xì)胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?細(xì)胞，ＸＷＬＣ－０５?細(xì)胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?細(xì)胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??圖５?Ａ５４９與ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞磷酸化ＡＫＴ與總ＡＫＴ的相對(duì)水平??３７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549細(xì)胞株體外培養(yǎng)細(xì)胞活力的比較研究[J]. 張?jiān)戚x,譚燕,袁兵,王盛蘭,趙珊,王廷華.  昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2011(07)
[2]肺癌細(xì)胞系XWLC-05的建立及其生物學(xué)特性研究[J]. 閆鳳彩,王秦秦,阮永華,馬麗菊,賈建桃,金克煒.  癌癥. 2007(01)
[3]室內(nèi)燃煤空氣污染與肺癌及遺傳易感性——宣威肺癌病因?qū)W研究22年[J]. 何興舟.  實(shí)用腫瘤雜志. 2001(06)
[4]云南個(gè)舊和宣威地區(qū)肺癌p53突變檢測(cè)研究[J]. 黃燕萍,金克煒,高倩,李寶剛.  華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(03)
[5]外源性野生型p53基因影響肺腺癌XWLC-05細(xì)胞放射敏感性研究[J]. 王承紅,李文輝,王秦秦,秦繼勇,李昕,侯宇,王麗,張國良.  中華放射腫瘤學(xué)雜志. 2011 (05)



本文編號(hào)：3500918