目的·研究微小RNA-143（miR-143）在人結(jié)腸癌及癌周正常組織中的表達,探索其對結(jié)腸癌HCT116、RKO細(xì)胞功能的影響及下游靶基因的預(yù)測。方法·設(shè)計合成并構(gòu)建miR-143慢病毒表達載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌HCT116、RKO細(xì)胞。實時熒光定量PCR檢測人結(jié)腸癌、癌周正常組織、慢病毒感染后HCT116和RKO細(xì)胞中miR-143的表達。Annexin V-APC單染法及流式細(xì)胞儀檢測感染前后細(xì)胞凋亡能力。Transwell法檢測感染前后HCT116、RKO細(xì)胞遷移能力的改變。Western blotting方法檢測FOSL2蛋白的表達。結(jié)果·miR-143在結(jié)腸癌組織中的表達量顯著低于癌周正常組織（0.339±0.454 vs 1.003±0.003）（U=16.000,Z=-4.231,P=0.000）。上調(diào)miR-143后,HCT116細(xì)胞凋亡率顯著高于陰性對照組（P=0.000）,RKO細(xì)胞凋亡率顯著高于陰性對照組（P=0.000）。上調(diào)miR-143后,HCT116遷移細(xì)胞數(shù)顯著低于陰性對照組（P=0.000）。miR-143下調(diào)后,RKO遷移細(xì)胞數(shù)顯著高于陰性對照組（... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017,37(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 標(biāo)本和細(xì)胞
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 慢病毒載體構(gòu)建與包裝
        1.3.1 mi R-143上調(diào)慢病毒載體構(gòu)建
        1.3.2 mi R-143下調(diào)慢病毒載體構(gòu)建
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞感染
    1.5總RNA抽提
        1.4.1 收取樣品及TRIzol裂解
        1.4.2 抽提總RNA
    1.6 反轉(zhuǎn)錄和實時熒光定量PCR
    1.7 細(xì)胞凋亡檢測
    1.8 Transwell遷移實驗
    1.9 Western blotting檢測HCT116細(xì)胞中FOSL2蛋白表達
    1.1 0 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 組織及細(xì)胞中mi R-143表達量
        2.1.1 組織中mi R-143表達
        2.1.2 病毒感染后HCT116、RKO細(xì)胞中mi R-143表達
    2.2 上調(diào)mi R-143對腸癌細(xì)胞凋亡的影響
    2.3 mi R-143對結(jié)腸癌細(xì)胞遷移的影響
    2.4 mi R-143對FOSL2蛋白的作用
3 討論



本文編號：3500575