[目的]通過構(gòu)建TLR4基因沉默SiRNA慢病毒載體,并轉(zhuǎn)染小鼠肝癌H22細(xì)胞,傳代培養(yǎng)H22細(xì)胞,構(gòu)建小鼠肝癌原位種植瘤模型,觀察小鼠肝臟種植瘤體積,應(yīng)用western blotting和免疫組化檢測TLR4蛋白分子,MyD88蛋白分子,NF-κB蛋白分子,TRAM蛋白分子的表達(dá)情況,評價RNAi沉默TLR4信號通路的慢病毒轉(zhuǎn)染H22肝癌細(xì)胞對小鼠肝臟原位種植瘤和通路關(guān)鍵分子表達(dá)的影響,進(jìn)而研究抑制TLR4信號通路對小鼠肝臟原位種植瘤的影響。[方法]（一）:H22細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代:（1）體外傳代培養(yǎng):課題前期已完成構(gòu)建TLR4基因沉默SiRNA慢病毒載體及轉(zhuǎn)染小鼠肝癌H22細(xì)胞。取出凍存在液氮罐中的肝癌H22細(xì)胞,在水浴鍋中快速解凍,加入DMEM培養(yǎng)基,離心棄上清液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶,放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。觀察細(xì)胞的生長,隔天進(jìn)行換液。傳代培養(yǎng)H22腫瘤細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)大于1×107。（2）體內(nèi)傳代培養(yǎng):離心收集處于對數(shù)期的H22腫瘤細(xì)胞,用生理鹽水洗滌后,接種于小鼠體內(nèi),腹水大量形成后,提取H22肝癌細(xì)胞重復(fù)操作,如此腹水傳代3次后,收集小鼠H22肝癌細(xì)胞,用生理鹽水洗滌后備用。（二）構(gòu)建... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１用微量注射器向小鼠肝左葉注入Ｈ２２腫瘤細(xì)胞??３模型觀察及細(xì)胞病理學(xué)檢測??３．?１模型觀察??

圖３?Ｈ２２空載體組普通顯微鏡下觀察（２００?Ｘ?）??

１．１?Ｈ２２肝癌細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)普通顯微鏡下觀察??普通顯微鏡下觀察Ｈ２２肝癌細(xì)胞的狀態(tài)，可見細(xì)胞形態(tài)圓潤飽滿，大小均一，折??光度好（如圖２，?３，?４）。??ＨＨ??圖２?Ｈ２２未轉(zhuǎn)染組普通顯微鏡下觀察（２００?Ｘ?）??ＷＢＨＵＢＵｍ??ＢｍｍＨｉ??圖３?Ｈ２２空載體組普通顯微鏡下觀察（２００?Ｘ?）??２４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2014年中國分地區(qū)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,孫可欣,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),赫捷.  中國腫瘤. 2018(01)
[2]乙型肝炎、丙型肝炎病毒相關(guān)性肝癌基因差異表達(dá)的生物信息學(xué)分析[J]. 秦健,李文靜,馮勇,陳朗.  武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(04)
[3]1685名乙肝病毒攜帶者肝癌防治知識的問卷調(diào)查分析[J]. 鄧麗,季明芳,馮謙謹(jǐn),吳標(biāo)華,李付貴.  中國腫瘤. 2017(04)
[4]炎癥細(xì)胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用及其作為治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展[J]. 馬守寶,林丹丹,劉海燕.  生命科學(xué). 2016(02)
[5]Toll樣受體4的表達(dá)及miR-TLR4干擾對HBV相關(guān)肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[J]. 曾治民,鐘瓊,何靜,歐陽玉茗,肖震宇,劉安文.  腫瘤防治研究. 2016(02)
[6]IL-6對肝癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響[J]. 李丹,葉麗平,仇會會,宋佳.  解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2016(04)
[7]肝癌患者腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-8水平變化及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]. 王雷,王煜霞,薛會朝.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2015(08)
[8]Incidence and mortality of liver cancer in China, 2010[J]. Kuang-Rong Wei,Xia Yu,Rong-Shou Zheng,Xia-Biao Peng,Si-Wei Zhang,Ming-Fang Ji,Zhi-Heng Liang,Zhi-Xiong Ou,Wan-Qing Chen.  Chinese Journal of Cancer. 2014(08)
[9]Daintain/AIF-1促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖與遷移[J]. 賈紹輝,姜華,杜仲夏,陳正望.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(02)
[10]腫瘤壞死因子-α在炎癥與腫瘤中的作用[J]. 趙瑋,徐景杰.  中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué). 2012(07)

碩士論文
[1]慢病毒介導(dǎo)SiRNA沉默H22肝癌細(xì)胞TLR4基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物特性的影響[D]. 鄒松杉.昆明醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號：3496033