背景與目的:腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma,Rcc）,是腎實(shí)質(zhì)惡性腫瘤最常見類型之一,腎小管上皮細(xì)胞為其細(xì)胞來源。腎癌病因復(fù)雜,目前已知的有吸煙、藥物、病毒及重金屬鎘等,其中,吸煙是其已知的明確的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。本課題通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討二氯乙酸（DCA）對人腎癌細(xì)胞株A498增殖、侵襲及遷移的影響,并分析其機(jī)制。方法:將人腎癌細(xì)胞株A498以RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng),分為陰性對照（NC）組、陽性對照（PC）組、DCA低劑量、中劑量、高劑量組。DCA3劑量組分別予以5、10、20 mmol/L DCA,NC組予以等容積無菌生理鹽水,PC組予以5-氟尿嘧啶5mg/L,培養(yǎng)48 h。四唑鹽比色法（MTT）檢測24h、48h后增殖抑制率;Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測侵襲能力;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測遷移能力;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（q RT-PCR）檢測Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin基因表達(dá);免疫印跡法（WB）檢測上述蛋白表達(dá)。結(jié)果:NC組48 h和24 h增殖抑制率相近（P>0.05）,余4組均顯著升高（P&l... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

采用MTT法檢測人腎癌細(xì)胞株A498培養(yǎng)24h、48h后增殖抑制率

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文19圖2：DCA處理后A498細(xì)胞株侵襲活性改變（Transwell小室實(shí)驗(yàn)）。A：NC組；B：PC組；C：DCA低劑量組；D：DCA中劑量組；E：DCA高劑量組。DCA處理后降低A498細(xì)胞侵襲能力，DCA處理后，穿過Transwell小室基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)目明顯減少。3.3遷移能力對比細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測各組遷移能力變化，于48h后在倒置相差顯微鏡下觀察，細(xì)胞遷移率=（1-愈合后間距/起始間距）×100%。各組遷移率對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），每2組對比DCA高劑量組＜DCA中劑量組/PC組＜DCA低劑量組＜NC組，除DCA中劑量組與PC組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），余每2組間對比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明DCA可降低人腎癌細(xì)胞株A498的遷移能力，且存在劑量依賴性。見圖3。圖3：DCA處理后A498細(xì)胞株遷移能力變化（劃痕實(shí)驗(yàn)）。A：NC組；B：PC

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖5：DCA處理引起上皮間質(zhì)標(biāo)志物蛋白水平的變化。A：NC組；B：PC組；C：DCA低劑量組；D：DCA中劑量組；E：DCA高劑量組。表現(xiàn)為E-cadherin蛋白含量減少及Snail、Slug、、N-cadherin、Vimentin蛋白含量的增加，且存在劑量依賴性，β-actin為內(nèi)參。4.討論目前關(guān)于腎癌的發(fā)病機(jī)制研究尚少，人們對其認(rèn)識也尚淺。關(guān)于該病病因報(bào)道[22-24]，大致可分為遺傳因素、精神因素、化學(xué)致癌物質(zhì)接觸、不良生活習(xí)慣等幾類，但仍需進(jìn)一步研究[25]。由于目前人們對該病的病因病機(jī)認(rèn)識少，且腎癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的能力強(qiáng)，臨床治療難度大，因而目前尚缺乏行之有效的抗腎癌治療方案。5-氟尿嘧啶是腎癌患者目前常用的化療藥物，在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)中均證實(shí)該藥物有一定的治療效果[26-27]，但腎癌患者的預(yù)后仍較差，且遠(yuǎn)期生存率低，仍需探討高效的用藥方案及其可能的作用機(jī)制，為臨床抗腎癌用藥的研究奠定基矗本研究增殖抑制率對比結(jié)果顯示，NC組24h、48h均處于高水平，其余4組均有所下降，且DCA高劑量組均最低，DCA中劑量組和PC組均稍高，DCA低劑


本文編號：3466714