背景:惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類的健康,目前腫瘤主要的傳統(tǒng)治療方法有手術(shù)、放療和化療。近年來免疫治療已逐漸成為腫瘤治療領(lǐng)域的焦點(diǎn),其中免疫細(xì)胞過繼治療成為研究的熱點(diǎn),基于嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞（Chimeric Antigen Receptor T-Cell,CAR T）的免疫療法已經(jīng)證明是一種有希望的癌癥治療策略,嵌合抗原受體T細(xì)胞通過基因工程技術(shù)使識別腫瘤特異性抗原的受體表達(dá)在T細(xì)胞表面,繞過抗原提呈階段以及MHC的限制對腫瘤產(chǎn)生殺傷作用。2017年FDA已批準(zhǔn)兩個(gè)CAR T分別用于急性淋巴細(xì)胞白血病和特定類型非霍奇金淋巴瘤。CAR T對于實(shí)體瘤的應(yīng)用仍受到一定的限制,CAR T治療過程中存在脫靶效應(yīng)、胞外段單鏈抗體結(jié)合抗原能力弱及產(chǎn)生免疫原性、利用慢病毒等方法制備CAR T細(xì)胞引起的插入突變等問題。因此,選擇更特異性的靶標(biāo)、結(jié)合能力更強(qiáng)的抗體,制備安全有效的CAR T細(xì)胞是當(dāng)前急需解決的問題。Endoglin（CD105）是相對分子量為180 k Da的同型二聚體細(xì)胞膜糖蛋白,被認(rèn)為是新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異標(biāo)志分子之一,表達(dá)于實(shí)體腫瘤新生血管及相關(guān)腫瘤細(xì)胞表面,因此以CD105為靶點(diǎn)構(gòu)... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

CD105CART細(xì)胞的制備及體內(nèi)抗腫瘤的示意圖

圖 2 PX330載體示意圖Figure 2 The schematic diagram of the targeting vectors2）使用限制性內(nèi)切酶 Bbs I 將 pX330 質(zhì)粒進(jìn)行酶切，反應(yīng)體系為：表 2-3 pX330 質(zhì)粒酶切體系pX330（1μg） 5μl10 ×2.1 Bμffer 5μlBbs I 1μldd H2O 39μlTotal 50μl反應(yīng)條件為：37℃ 1 小時(shí)3）凝膠制備及產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳：稱取適當(dāng)?shù)沫傊牵↙E Agarose）入 1 x TAE，放入微波爐中中高溫加熱使瓊脂粉完全溶解，期間振搖

圖 3同源重組載體 Puc-Mdonor-AAVS1-CAR 構(gòu)建示意圖Figure 3 The construction schematic diagram of Puc-Mdonor-AAVS1-受體表達(dá)載體制備靶向 CD105 納米抗體的嵌合抗原受體片段，兩ot I 位點(diǎn)，將片段亞克隆至表達(dá)載體 p LVX 中，所AR 重組表達(dá)載體經(jīng) PCR 驗(yàn)證和測序正確后，提取達(dá)載體酶切系放置 37度酶切 1 小時(shí)，2%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)酶切產(chǎn)物。表 2-10 載體雙酶切體系pLVX，50ng 1 μlEcoRI 1 μl

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療對實(shí)體腫瘤療效的薈萃分析（英文）[J]. Xiao-peng LAN,You-gen CHEN,Zheng WANG,Chuan-wei YUAN,Gang-gang WANG,Guo-liang LU,Shao-wei MAO,Xun-bo JIN,Qing-hua XIA.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2015(09)



本文編號：3454170