研究背景和目的：胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一,在國(guó)內(nèi)外發(fā)病率均較高。世界范圍內(nèi)其死亡率高居惡性腫瘤的第2位。胃癌發(fā)病與多種因素有關(guān),考慮為環(huán)境與基因因素復(fù)雜的交互作用。然而,具體的發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明。胃癌的診斷主要依靠胃十二指腸鏡檢結(jié)合組織學(xué)病理檢測(cè)。病理類型以腺癌為主,根據(jù)浸潤(rùn)深度分為早期胃癌,進(jìn)展期胃癌。在我國(guó),早期胃癌的檢出率低,臨床確診的病例多為進(jìn)展期胃癌。胃癌的治療目前是以胃癌根治術(shù)為基礎(chǔ)的綜合治療。早期胃癌預(yù)后較好,手術(shù)治療后5年生存率可以達(dá)到90%以上,但是進(jìn)展期胃癌術(shù)后容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,預(yù)后差,死亡率高。為提高療效,術(shù)后多需輔助放化療治療。胃癌細(xì)胞對(duì)放射治療敏感性低,目前臨床上多不主張術(shù)前放療,仍以化療為主。雖然近年來(lái)不斷有化療藥物的更新?lián)Q代及一些新的觀念與治療措施如術(shù)前新輔助化療、術(shù)中化療等出現(xiàn),輔助治療的效果并未出現(xiàn)根本性的改觀,中晚期患者5年生存率并未得到明顯改善。因此,更加深入的探索胃癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制以及探尋更加有效的治療措施顯得更為重要。正常胃上皮細(xì)胞惡變的分子基礎(chǔ)為胃正常粘膜上皮細(xì)胞增殖與凋亡的失衡,而其平衡則依賴大量癌基因、抑癌基因以及細(xì)胞因子等的調(diào)控... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１．胃癌及癌旁正常組織利用ｍｉ民ＮＡ基因芯片技術(shù)高通量檢測(cè)后熱圖分析結(jié)果??Ｆｉｇ．ｌ－?１?Ｃｌｕｓｔｅｒ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅ巧ｅｄ?ｍｉＲＮＡｓ?ｉｎ?ＧＣ?ｓａｍｐｌｅｓ?

ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因作為進(jìn)一步研究目標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ｓｕｒｖｉｖｉｎ?ｍＲＮＡ的３’ＵＴＲ存在ｍｉＲ－３３５結(jié)合的位點(diǎn)，如上圖所示。因此，針對(duì)此預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)，我們相應(yīng)的報(bào)告基因載體，擬進(jìn)行雙巧光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證該結(jié)合位點(diǎn)。??２．２．２?ｍ瓜－３３５與ｓｕｒｖｉｖｉｎ結(jié)合目標(biāo)巧點(diǎn)驗(yàn)證??

?ＢＩＲＣＳ＾?ＢｉＲＣ－ｒｏｕｔ??圖２－２?ｍ化－３３５直接結(jié)合于ｓｕｒｖｉｖｉｎ?ｍＲＮＡ?３’ＵＴ民端??Ｆｉｇ２－２?ＨＥＫ?２９３?Ｔ?ｃｄｌｓ?（ｂ）?ａｎｄ?ＳＧＣ－７９０１?ｃｅｌｌｓ?（ｃ）?＼ｖｅｉ＊ｅ?ｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃ化ｄ?ｗｉ化?ｅｋｈｅｒ?１００?ｎＭ??ｍｉＲ－３３５?ｍｉｍｉｃｓ?ｏｒ?ＮＣ?ｏ＂ｇｏｓ?ａｎｄ?２００?口ｇ?ｄｕａｌ?ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ｒｅｐｏｒｔｅｒ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｃａｒｒｙｉｎｇ?ｅｉ化ｅｒ?ＷＴ?ｏｒ??ＭＵＴ?３＇－ＵＴＲ?ｏｆ?ＢＩＲＣ５．Ｒｅｌａｔｉｖｅ?巧ｒｅｆｌｙ?ｌｕｃｉｆｅｉ‘ａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｍｅａｓｕｒｅｄ?２４?ｈ?ａｆｔｅｒ?化ａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ａｎｄ??ｗａｓ?ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ?ｗｉｔｈ?ｒｅｎｉｌｌａ?ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ．??雙巧光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)是一種經(jīng)典的用于驗(yàn)證ｍｉＲＮＡ與祀基因相結(jié)合的??實(shí)驗(yàn)方法。根據(jù)軟件預(yù)測(cè)的ｍｉＲ－３３５與ｓｕｒｖｉｖｉｎ可能的結(jié)合位點(diǎn)，我們首先將包含??有該結(jié)合位點(diǎn)的序列片段（野生型及突變型）插入焚光載體中，構(gòu)建癸光質(zhì)粒。??野生型及突變型分別命名為ｐｍｉｒＧＬＯ－ＢＩＲＣ５－ＷＴ和ｐｍｉｒＧＬＯ－Ｂ化Ｃ５－ＭＵＴ。利用??雙巧光素酶報(bào)告基因法檢測(cè)共轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－３３５?ｍｉｍｉｃ或ｎｅｇｅｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ及野生型或??突變型質(zhì)粒后焚光素酶活性的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與陰性對(duì)照相比，在ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)??胞株中觀察到

【參考文獻(xiàn)】：
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