研究背景和目的:緊密連接蛋白是存在于上皮細胞與內(nèi)皮細胞之間的一種蛋白質(zhì),其作用是保持細胞間結(jié)構(gòu)的完整性。OCCLUDIN蛋白作為緊密連接蛋白中主要一種類型,它的結(jié)構(gòu)或表達發(fā)生變化會導(dǎo)致緊密連接結(jié)構(gòu)及功能的改變,最終引起一些臨床疾病的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),OCCLUDIN在多種腫瘤組織中表達異常,且OCCLUDIN與腫瘤細胞增殖、凋亡和侵襲遷移等有密切關(guān)系。而目前關(guān)于OCCLUDIN對非小細胞性肺癌發(fā)生發(fā)展影響及其作用機制尚不清楚。因此,本研究主要通過熒光定量PCR、Western blot、CCK-8法、流式細胞術(shù)、transwell實驗、腫瘤細胞原位種植轉(zhuǎn)移模型建立等方法,在體內(nèi)外探討OCCLUDIN對非小細胞性肺癌細胞增殖、凋亡和侵襲遷移的影響。研究方法:收集非小細胞肺癌癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本,采用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)分別檢測組織中OCCLUDIN mRNA和蛋白表達水平。OCCLUDIN siRNA轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌細胞SPC-A1 48h后,采用CCK-8法檢測OCCLUDIN對SPC-A1細胞增殖影響,并通過建立腫瘤細胞原位種植轉(zhuǎn)移模型在體內(nèi)驗證OCCLUD... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在非小細胞肺癌細胞株中表達情況??

轉(zhuǎn)染４８ｈ后，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法進行蛋白表達檢測。與ｃｏｎｔｒｏ丨組和??ｓｉＣｔｒｌ組相比，５０?ｎＭ?ｓｉＯＣＬＮ組的ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表達水平顯著降低??（Ｐ＜０．００１）（圖３－Ａ，?Ｂ）。上述結(jié)果表明，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染效率較高，??后續(xù)研究將選擇５０?ｎＭ?ｓｉＲＮＡ濃度進行轉(zhuǎn)染實驗。??Ａ?Ｂ?°－８＇??ＯＣＬＮ?—？一》－?１１?０－４－?Ｗｍ??ＧＡＰＤＨ?ｍａｍ?ｒｎｍｍ?ｍｔｍ?１?—??０－２－?…??ＳＰＣ－Ａ１?ａ?＞?；—??ｔ?＿??／?＃?／??圖３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染后ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表達情況??Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表達情況；Ｂ：?ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表??達量的統(tǒng)計情況，＊＊＊Ｐ＜０．００１，ｓｉＯＣＬＮ組與ｃｏｎｔｒｏ丨和ｓｉＣｔｒｌ組比較??３．３?ＯＣＣＬＵＤＩＮ對ＳＰＣ－Ａ１細胞增殖的影響??為探宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ是否會影響ＳＰＣ－Ａ１細胞增殖，本部分我們采用細胞和??動物實驗分別研宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ對ＳＰＣ－Ａ１細胞增殖的影響，同時我們也通過檢??測細胞周期來探討調(diào)控細胞增殖的機制。??３．３．１?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在體外對ＳＰＣ－Ａ１細胞增殖的影響??為觀察ＯＣＣＵＪＤＩＮ對ＳＰＣ－Ａ１細胞增殖能力的作用，本研宄通過ＣＣＫ８實??驗檢測ｃｏｎｔｒｏｌ組、ｓｉＣｔｒｌ組和ｓｉＯＣＬＮ組的細胞增殖能力。ＣＣＫ８實驗結(jié)果顯??示

驗檢測ｃｏｎｔｒｏｌ組、ｓｉＣｔｒｌ組和ｓｉＯＣＬＮ組的細胞增殖能力。ＣＣＫ８實驗結(jié)果顯??示，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?被沉默后，ｓｉＯＣＬＮ?組細胞在?２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ?和?１２０ｈ?的??吸光度較ｃｏｎｔｒｏ丨組和ｓｉＣｔｒｌ組均明顯降低（圖４），反映細胞增殖能力減弱。以??上結(jié)果表明，沉默ＯＣＣＬＵＤＩＮ可以顯著抑制ＳＰＣ－ＡＩ細胞增殖能力。??２７??

【參考文獻】：
期刊論文
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