目的:研究幽門螺桿菌誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞產(chǎn)生的自噬對(duì)胃癌細(xì)胞多藥耐藥的影響,并探討其分子機(jī)制。方法:胃癌SGC7901細(xì)胞在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取生長(zhǎng)在對(duì)數(shù)期的胃癌細(xì)胞,將實(shí)驗(yàn)分成四組:空白組、幽門螺桿菌組（HP組）、PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002組（LY組）、幽門螺桿菌+LY294002組（LY組）。利用單丹磺酰尸胺（monodansylcadaverin MDC）熒光染色法觀察胃癌細(xì)胞自噬形態(tài)和細(xì)胞形態(tài)的變化;利用Western blot法檢測(cè)胃癌細(xì)胞中P-gp、p-Akt、Beclin1蛋白的表達(dá);利用RT-PCR法檢測(cè)Beclin1基因和MDR1基因的表達(dá)。結(jié)果:前期實(shí)驗(yàn)已明確誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞耐藥的幽門螺桿菌超聲裂解液最佳濃度為5ug/mL。1.MDC染色結(jié)果顯示,各個(gè)分組胃癌SGC7901細(xì)胞均可見自噬小體聚集在胞漿中,聚集在細(xì)胞核周圍,在280nm紫外光下藍(lán)染,與空白組相比,HP組胃癌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的空泡化,形成的自噬小體明顯增加;LY組胃癌細(xì)胞中空泡化程度明顯減少,形成的自噬體數(shù)II量明顯減少;HP+LY組細(xì)胞內(nèi)空泡化細(xì)胞數(shù)目及自噬小體形成的數(shù)量較空白組明顯增加... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

幽門螺桿菌超聲裂解液及LY294002對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC7901細(xì)胞自噬的影響，采用MDC染色，放大400倍

通過Western Blot方法檢測(cè)幽門螺桿菌超聲裂解液及LY294002處理人胃癌細(xì)胞SGC7901細(xì)胞24小時(shí)后，多藥耐藥相關(guān)蛋白p-gp的表達(dá)，以及自噬相關(guān)蛋白Beclin1、p-Akt的表達(dá)。結(jié)果如圖2-4和表1所示，在不同處理因素處理胃癌SGC7901細(xì)胞后，HP組P-gp、Beclin1和p-Akt蛋白的表達(dá)量分別是0.84±0.09、1.09±0.04、0.98±0.09，而LY組三種蛋白的表達(dá)量分別是0.53±0.10、0.47±0.01、0.59±0.05。與空白組相比，HP組三組蛋白的表達(dá)明顯增加，LY組較空白組亦明顯增強(qiáng)，而與HP組相比，三種蛋白表達(dá)量顯著下降。各組間灰度比值比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)圖 2 幽門螺桿菌超聲裂解液及 LY294002 處理胃癌 SGC7901 細(xì)胞對(duì) p-gp 表達(dá)的影響（#

幽門螺桿菌超聲裂解液及LY294002處理胃癌SGC7901細(xì)胞對(duì)p-Akt表達(dá)的影響（#，*P<0.05）

【參考文獻(xiàn)】：
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