研究背景:急性髓系白血病（AML）是一種常見的血液系統(tǒng)腫瘤,起病急,預(yù)后較差。阿糖胞苷（ara-C）是用于治療AML的主要一線化療藥,耐藥是造成AML治療失敗的主要原因。研究發(fā)現(xiàn),SAMHD1是一種新的ara-C耐藥因子,可以減弱ara-C對于AML的殺傷作用,造成治療失敗。因而,特異性抑制腫瘤細(xì)胞中的SAMHD1提供了一種提高阿糖胞苷有效性的潛在有效方法。但是,目前并無可用的針對腫瘤細(xì)胞中SAMHD1的抑制劑。研究方法:本研究通過質(zhì)譜系統(tǒng)（MS）、免疫共沉淀（co-IP）以及免疫熒光（IF）的方法來證明SAMHD1和HSP90在AML細(xì)胞中的相互作用,并且利用截短突變體鑒定出其特定的結(jié)合區(qū)域。再者,采用免疫印跡（WB）和熒光定量PCR（qRT-PCR）等方法被用來檢測HSP90抑制劑處理后的細(xì)胞中SAMHD1及其它蛋白的表達(dá)變化。本研究也通過MTT方法在體外水平、以及使用AML疾病模型B-NDG小鼠在體內(nèi)水平證明了 ara-C和HSP90抑制劑聯(lián)合用藥的效果。此外,我們還使用了免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)來研究HSP90抑制劑對于鼠免疫細(xì)胞的影響。實驗結(jié)果:我們首次發(fā)現(xiàn)SAMHD1在... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１?ＰＬＫＯ．ｌ?ｐｕｒｏ質(zhì)粒載體圖譜??２．２．９

浙江大學(xué)碩土學(xué)位論．文?正文ＩＩＳＰ９０在ＡＭＬ．細(xì)胞中可：以在蛋白：水平上調(diào)節(jié)ＳＡ．Ｍ１Ｄ１??驗，結(jié)合蛋白用質(zhì)譜進(jìn)行分析來鑒定其結(jié)合因子。如圖２．２在與ＳＡＭＨＤ１結(jié)合的??蛋白譜中，我們注意到了?ＨＳＰ９０這個蛋白，因其作為一個常見的細(xì)胞伴侶，其在??維持蛋白穩(wěn)定、成熟中扮演著重要的作用３９。??？？？？?ＨＩＳＴ２Ｈ２ＢＥ??？?ｈｓｐｏｉ??Ｉ?、一?—?／?＿?個?＼??＊?ＩＬＦ２?＾?／?ＳＬＣ２ＳＡＳ＾?／?Ｅ，Ｆ５Ａ??＼?？？ｎｐａ２ｂ，?？?＾?＼?＼?／?ＡＴＰａｓｅ??１?刪?Ｄ；?＇＜?＿??＼?ＨＮＲＮＰＡ１?—?ＨＳＰＡ５??ｐａｂｐｃｉ?瞻隱?＼?＇＿３??＿ａ＿８ＭＣ３??圖２．２質(zhì)譜分析與ＳＡＭＨＤ１結(jié)合的蛋白??在ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ＳＡＭＨＤ１－ＨＡ質(zhì)粒，而后進(jìn)行ｃｏ－ＩＰ：?ＨＡ，再用??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的方法確定了?ＳＡＭＨＤ１和ＨＳＰ９０的相互作用。接下來，我們、用??Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ａ／Ｇ磁珠結(jié)合ＨＳＰ９０特異性抗體做ｃｏ－ＩＰ實驗，確定了其在ＴＨＰ－１和Ｍｏｌｍ－??１３這些ＡＭＬ細(xì)胞系中內(nèi)源的相互作用關(guān)系（圖２．３）。??ＨＥＫ２９３Ｔ??ＳＡＭＨＤ１＊ＨＡ?＿―＂廠咖?＿＾＿?—ＭＳｔ－２３＿??ＩＢ：???｜Ｂ；?ＩＰ：Ｉ？Ｇ?ＩＰ；ＨＳＰ９０?Ｗ＞ａ?，Ｂ；?ＩＰ：ｌｇＧ?ＩＰ：ＨＳＰ９０?ｋＯａ??ＨＳＰ９Ｃ?“?ＨＳＰ９０?Ｉ?｜￣１〇〇?｜?ＨＳＰ９０??Ｉ??１?一?Ｉｎｐｕｔ?ｎｐｕｔ?????ｎｐｕｔ??ＨＡ?｜?ｍｍ＼?—?７０?ＳＡＭＫ５１?｜?７０?

圖２．３?Ｃｏ－ＩＰ結(jié)果鉦明ＳＡＭＨＤ１與ＨＳＰ９０結(jié)合??


本文編號：3430083