目的:探討在胰腺癌細胞中,miRNA-200c（miR-200c）對AHNAK基因的表達及細胞侵襲能力的影響。方法:在胰腺癌細胞SW1990和PANC-1中,轉染miR-200c類似物（miR-200c mimics）及其陰性對照（Scramble）24小時后,利用實時定量PCR檢測miR-200c是否過表達成功;采用Transwell侵襲實驗,來檢測miR-200c過表達后SW1990和PANC-1細胞侵襲力的變化;采用TargetScan、PicTar和miranda數據庫預測miR-200c的靶基因。使用miranda數據庫預測靶基因AHNAK的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）與miR-200c的結合位點;構建靶基因AHNAK的3’UTR（野生型3’UTR）與miR-200c的結合位點突變的序列（突變型3’UTR）。在SW1990及PANC-1細胞中,按照上述分組進行轉染實驗,按照Dual-luciferase試劑盒說明書檢測螢火蟲和海腎熒光素酶活性的變化,驗證miR-200c與AHNAK的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）的結合能力;并用蛋白免疫印跡（Western Blotting）實驗檢... 

【文章來源】：東南大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
文獻綜述
第一章 實驗材料和方法
    (一)實驗材料
        1.研究對象
        2.實驗試劑
        3.儀器設備
        4.試劑配制
    (二)實驗方法
        1.細胞培養(yǎng)
        2.細胞轉染
        3.實時定量PCR
        4.Transwell細胞侵襲實驗
        5.生物信息學方法預測miR-200c靶基因
        6.雙熒光素酶報告基因實驗
        7.蛋白免疫印跡
        8.統計學分析
第二章 實驗結果
    2.1 實時定量PCR檢測miR-200c的表達
    2.2 miR-200c過表達對胰腺癌細胞侵襲的影響
    2.3 AHNAK是 miR-200c的靶標
    2.4 miR-200c過表達下調了AHNAK蛋白的表達
第三章 討論
結論
本次實驗的意義和不足
致謝
參考文獻
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Noncoding RNAs and pancreatic cancer[J]. Juan-Fei Peng,Yan-Yan Zhuang,Feng-Ting Huang,Shi-Neng Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)



本文編號：3427751