目的:探討在胰腺癌細(xì)胞中,miRNA-200c（miR-200c）對AHNAK基因的表達(dá)及細(xì)胞侵襲能力的影響。方法:在胰腺癌細(xì)胞SW1990和PANC-1中,轉(zhuǎn)染miR-200c類似物（miR-200c mimics）及其陰性對照（Scramble）24小時(shí)后,利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測miR-200c是否過表達(dá)成功;采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn),來檢測miR-200c過表達(dá)后SW1990和PANC-1細(xì)胞侵襲力的變化;采用TargetScan、PicTar和miranda數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-200c的靶基因。使用miranda數(shù)據(jù)庫預(yù)測靶基因AHNAK的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）與miR-200c的結(jié)合位點(diǎn);構(gòu)建靶基因AHNAK的3’UTR（野生型3’UTR）與miR-200c的結(jié)合位點(diǎn)突變的序列（突變型3’UTR）。在SW1990及PANC-1細(xì)胞中,按照上述分組進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),按照Dual-luciferase試劑盒說明書檢測螢火蟲和海腎熒光素酶活性的變化,驗(yàn)證miR-200c與AHNAK的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）的結(jié)合能力;并用蛋白免疫印跡（Western Blotting）實(shí)驗(yàn)檢... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
文獻(xiàn)綜述
第一章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    (一)實(shí)驗(yàn)材料
        1.研究對象
        2.實(shí)驗(yàn)試劑
        3.儀器設(shè)備
        4.試劑配制
    (二)實(shí)驗(yàn)方法
        1.細(xì)胞培養(yǎng)
        2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.實(shí)時(shí)定量PCR
        4.Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        5.生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-200c靶基因
        6.雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        7.蛋白免疫印跡
        8.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.1 實(shí)時(shí)定量PCR檢測miR-200c的表達(dá)
    2.2 miR-200c過表達(dá)對胰腺癌細(xì)胞侵襲的影響
    2.3 AHNAK是 miR-200c的靶標(biāo)
    2.4 miR-200c過表達(dá)下調(diào)了AHNAK蛋白的表達(dá)
第三章 討論
結(jié)論
本次實(shí)驗(yàn)的意義和不足
致謝
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Noncoding RNAs and pancreatic cancer[J]. Juan-Fei Peng,Yan-Yan Zhuang,Feng-Ting Huang,Shi-Neng Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)



本文編號(hào)：3427751