目的:結(jié)腸癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,趨化因子受體也在各種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中有重要作用。趨化因子受體7（Chemokine receptor 7,CXCR7）是7次跨膜G蛋白耦聯(lián)受體超家族,具有趨化因子受體的典型結(jié)構(gòu),在許多腫瘤中均有表達(dá)。既往有證據(jù)表明CXCR7促進(jìn)結(jié)腸癌的血管生成,但這一過程中涉及的機(jī)制尚不清楚。本研究的目的在于研究CXCR7在結(jié)腸癌中的功能。本研究通過體內(nèi)和體外同時(shí)驗(yàn)證,并運(yùn)用超聲造影（Contrast-enhanced ultrasound,CEUS）技術(shù)探討在小鼠結(jié)腸癌異種移植瘤中過表達(dá)或沉默CXCR7后灌注參數(shù)與微血管密度（microvessel density,MVD）之間的相關(guān)性。研究方法:本研究以正常結(jié)腸細(xì)胞（HCoEpic）和結(jié)腸癌RKO、HCT116、SW480、Caco-2細(xì)胞系為研究對象。首先,通過qRT-PCR和Western Blot法檢測正常結(jié)腸細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞中CXCR7的表達(dá)。其次,對篩選出的兩種CXCR7表達(dá)最高和表達(dá)最低的細(xì)胞系進(jìn)行沉默或過表達(dá)并通過qRT-PCR和Western Blot法檢測其轉(zhuǎn)染效率。再者,通過CCK-... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

HCoEpic、RKO、HCT116、SW480和Caco-2細(xì)胞中CXCR7的表達(dá)

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文16圖1.2過表達(dá)或沉默的結(jié)腸癌細(xì)胞中CXCR7的表達(dá)A：qRT-PCR和Westernblot法檢測沉默CXCR7的SW480細(xì)胞中mRNA和蛋白的表達(dá)水平降低。B：qRT-PCR和Westernblot法檢測過表達(dá)CXCR7的Caco-2細(xì)胞中mRNA和蛋白的表達(dá)水平增高。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=3）。與各組陰性對照組相比，*P＜0.05、**P＜0.01和***P＜0.001為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2過表達(dá)或沉默CXCR7的結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖作用3.2.1EdU法檢測結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖作用為了研究過表達(dá)或沉默CXCR7的結(jié)腸癌細(xì)胞對增殖的影響，通過EdU檢測過表達(dá)或沉默CXCR7的結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖活性。結(jié)果證明，與陰性對照組相比，沉默CXCR7的SW480細(xì)胞的EdU陽性細(xì)胞的數(shù)量顯著減少（圖1.3A）。相反，與陰性對照組相比，過表達(dá)CXCR7的Caco-2細(xì)胞的EdU陽性細(xì)胞的數(shù)量顯著增加（圖1.3B）。此外，我們注意到陰性對照組和空白對照組的結(jié)腸癌細(xì)胞之間沒有顯著差異（P＞0.05）。圖1.3EdU法檢測結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖作用A：左圖：沉默CXCR7的SW480細(xì)胞的EdU陽性細(xì)胞的代表性圖像，右圖：EdU陽性細(xì)胞的定量測量表明CXCR7的沉默減少了SW480細(xì)胞的增殖。B：左圖：過表達(dá)CXCR7

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文183.3Transwell法檢測過表達(dá)或沉默CXCR7的結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移作用通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，沉默CXCR7的SW480細(xì)胞的遷移能力顯著降低（圖1.5A）。相反，與陰性對照組相比，過表達(dá)CXCR7的Caco-2細(xì)胞的遷移能力顯著增加（圖1.5B）。此外，陰性對照組與空白對照組之間的差異不顯著（P＞0.05）。圖1.5Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移能力A：上圖：沉默CXCR7的SW480細(xì)胞遷移的代表性圖像；下圖：遷移細(xì)胞數(shù)量的定量測量表明CXCR7的沉默減少了SW480細(xì)胞的遷移。B：上圖：過表達(dá)CXCR7的Caco-2細(xì)胞遷移的代表性圖像；下圖：遷移細(xì)胞數(shù)量的定量測量表明CXCR7的過表達(dá)增加了Caco-2細(xì)胞的遷移。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=3）。與各組陰性對照組相比，*P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。放大倍數(shù)×200。3.4過表達(dá)或沉默CXCR7的腫瘤細(xì)胞對HUVEC增殖的影響3.4.1EdU法檢測腫瘤細(xì)胞對HUVEC增殖的影響為了研究CXCR7對HUVEC增殖的可能影響，通過EdU檢測沉默CXCR7的SW480細(xì)胞和過表達(dá)CXCR7的Caco-2細(xì)胞共培養(yǎng)的HUVEC的增殖活性。結(jié)果證明，與陰性對照組相比，與沉默CXCR7的SW480細(xì)胞共培養(yǎng)的EdU陽性HUVEC細(xì)胞的數(shù)量顯著減少（圖1.6A）。相反，與陰性對照組相比，與過表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Effects of CXCR7-neutralizing antibody on neurogenesis in the hippocampal dentate gyrus and cognitive function in the chronic phase of cerebral ischemia[J]. Bing-Chao Dong,Mei-Xuan Li,Xiao-Yin Wang,Xi Cheng,Yu Wang,Ting Xiao,Jukka Jolkkonen,Chuan-Sheng Zhao,Shan-Shan Zhao.  Neural Regeneration Research. 2020(06)
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