背景甲狀腺癌（Thyroid cancer）是臨床上最常見(jiàn)的內(nèi)分泌惡性腫瘤,包括分化良好的甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid cancer,PTC）,占甲狀腺癌發(fā)病率的80%～90%。疑似甲狀腺結(jié)節(jié)的患者通常通過(guò)超聲,計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）等進(jìn)行檢查,隨后經(jīng)術(shù)前超聲引導(dǎo)細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查（fine needle aspiration cytology,FNAC）和術(shù)中病理檢查冷凍切片檢查診斷甲狀腺乳頭狀癌患者。FNAC是目前術(shù)前最可靠的臨床診斷方法,但是有約20%左右的甲狀腺病理組織經(jīng)FNAC診斷為未確定意義的非典型性的濾泡性病變、濾泡性腫瘤或疑似濾泡性腫瘤、或疑似的惡性腫瘤。無(wú)法進(jìn)行術(shù)前的準(zhǔn)確診斷造成了非要手術(shù)的增加,研究發(fā)現(xiàn),5%的病人經(jīng)手術(shù)切除組織后,診斷發(fā)現(xiàn)仍然需要進(jìn)行二次甲狀腺全切手術(shù),而且兩次手術(shù)的復(fù)發(fā)發(fā)病率明顯高于FNA檢出后的一次手術(shù)的發(fā)病率。利用分子標(biāo)記物輔助診斷能夠提高腫瘤的檢出,CCT3是參與細(xì)胞的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的折疊,調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和發(fā)展,在肝癌、肺癌等癌癥的臨床診斷和預(yù)后檢查中具有重要的實(shí)用價(jià)值和參考意義。甲狀腺乳頭狀癌的治療方法主要為甲狀腺全... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．甲狀腺乳頭狀癌組織的ＨＥ染色結(jié)果

在本研宄的甲狀腺乳頭狀癌組織樣本中表達(dá)高，而在癌旁組織表達(dá)相對(duì)很低（圖??２Ａ－Ｂ）。其中，ＣＣＴ３主要在甲狀腺乳頭狀癌組織的細(xì)胞核位置表達(dá)，胞漿也有??表達(dá)，相對(duì)較少（圖２Ａ－Ｂ）。這一結(jié)果表明，ＣＣＴ３在甲狀腺乳頭狀癌組織中表??達(dá)豐度高，提示我們ＣＣＴ３與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展具有重要關(guān)聯(lián)。??為了進(jìn)一步研宄ＣＣＴ３表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的關(guān)系，本研究定量分析了??ＣＣＴ３在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性率（具有ＣＣＴ３表達(dá)的細(xì)胞占??全部細(xì)胞的比例）。即將免疫俎化的結(jié)果按照顏色深度不同評(píng)定為４個(gè)等級(jí)并計(jì)??分，顏色最淡的記為０分；顏色最深的記為３分，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表１所示；同時(shí)，??對(duì)多個(gè)視野下表達(dá)ＣＣＴ３的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)其占視野中總細(xì)胞數(shù)目的比例，??即豐度（或稱(chēng)陽(yáng)性率）；同樣將豐度分為４個(gè)等級(jí)并計(jì)分，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表２所示。??我們將表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性率打分結(jié)果的乘積作為ＣＣＴ３在腫瘤組織中表達(dá)情況的??暈化指標(biāo)，比較病人甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁對(duì)照組織之間ＣＣＴ３表達(dá)差異。??結(jié)果如圖２Ｃ所示，所有甲狀腺乳頭狀癌組織樣本均存在ＣＣＴ３表達(dá)，而癌旁組??織中ＣＣＴ３表達(dá)量極低

長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)ｓｈＲＮＡ。感染陰性對(duì)照（ｓｈＣＴＲＬ）慢病毒作為本研宄的陰性??對(duì)照。通過(guò)熒光顯微鏡觀察感染ｓｈＲＮＡ慢病毒７２小時(shí)后Ｋ丨細(xì)胞表達(dá)綠色熒光??蛋白（ＧＦＰ）的熒光強(qiáng)度來(lái)評(píng)價(jià)感染效果，結(jié)果如圖４Ａ－Ｂ所示，視野下＞９０％的??細(xì)胞成功感染了攜帶ｓｈＣＣＴ３或ｓｈＣＴＲＬ的慢病毒，并成功表達(dá)載體序列和蛋白。??為了對(duì)ＲＮＡ干擾ＣＣＴ３表達(dá)的效果進(jìn)行定量，我們采用ｑＰＣＲ檢測(cè)ＣＣＴ３??的ｍＲＮＡ的表達(dá)水平并且用Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測(cè)ＣＣＴ３的蛋白表達(dá)水平。實(shí)時(shí)定量??ＰＣＲ結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照ｓｈＣＴＲＬ組相比，ｓｈＣＣＴ３組ＣＣＴ３的ｍＲＮＡ表達(dá)量??約為ｓｈＣＴＲＬ組的丨０％左右（圖４Ｃ）。同時(shí)，Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ結(jié)果顯示，ｓｈＣＣＴ３??組的細(xì)胞中的ＣＣＴ３蛋白表達(dá)水平顯著低于ｓｈＣＴＲＬ組的ＣＣＴ３的蛋白的表達(dá)水??平（圖４Ｄ）。??以上這些結(jié)果表明，我們成功建立了利用慢病毒ＲＮＡｉ沉默甲狀腺乳頭狀癌??細(xì)胞系Ｋ１細(xì)胞中ＣＣＴ３的表達(dá)的方法，獲得了有效沉默ＣＣＴ３的Ｋ１細(xì)胞，將??該細(xì)胞作為研究沉默ＣＣＴ３對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞影響的工具。??３１??

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3398207