目的:觀察鼠T細胞淋巴瘤細胞株EL4細胞能否被小鼠巨細胞病毒（Murine cytomegalovirus,MCMV）感染及其感染前后對EL4細胞形態(tài)的變化及凋亡的影響。方法:分別以感染復數(shù)（multiplicity of infection,MOI）為1、10、100的MCMV smith株感染EL4細胞,于感染后1、3和5 d收集細胞;設(shè)立正常對照組、MOI=1感染組、MOI=10感染組、MOI=100感染組;另外設(shè)有更昔洛韋（ganciclovir,GCV）組、MCMV+GCV組。應(yīng)用瑞氏-姬姆薩染色后光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài),臺盼藍抗染法計數(shù)細胞存活率,實時熒光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-qPCR）檢測感染細胞內(nèi)MCMV DNA基因拷貝數(shù),流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡,RT-qPCR檢測感染細胞P53、P21、cFlip、Caspase8的mRNA表達水平,Western blot檢測Caspase8、P53、BAX、BCL-2、Cleaved-Caspase3的蛋白表達水平。結(jié)果:瑞氏-姬姆薩染色后光學顯微鏡下可見被MCMV感染的EL4... 

【文章來源】：中國實驗血液學雜志. 2018,26(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    試劑與儀器
    細胞培養(yǎng)
    動物飼養(yǎng)
    MCMV病毒擴增
    實驗步驟
    細胞形態(tài)學變化的相差顯微鏡術(shù)觀察
    細胞存活率的臺盼藍染色法測定
    MCMV DNA和感染ELA細胞相關(guān)基因?qū)崟r熒光定量PCR檢測
    細胞凋亡的Annexin V FITC/PI雙染染色檢測
    蛋白表達的Western blot檢測
    統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    細胞形態(tài)的變化
    細胞內(nèi)MCMV DNA拷貝數(shù)變化
    MCMV感染對EL4細胞存活率、凋亡的影響
    MCMV感染EL4細胞后凋亡蛋白P53和Caspase8、周期蛋白P21、抗凋亡蛋白c Flip mRNA表達水平的影響
    MCMV感染EL4細胞凋亡蛋白P53、BAX/BCL-2、Cleaved-caspase3、Caspase8的表達水平
    更昔洛韋 (GCV) 對MCMV感染的EL4細胞凋亡及相關(guān)凋亡蛋白的影響
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Human cytomegalovirus protects multiple myeloma cell line KM3 cells from apoptosis induced by growth factor withdrawal[J]. 魏國慶,林茂芳,黃河,蔡真.  Chinese Medical Journal. 2004(06)



本文編號：3394626