目的:本研究通過在體外細胞培養(yǎng)上,應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默ERK1/2基因后,分析其總的ERK基因的mRNAs、下游靶向蛋白表達、及其磷酸化水平變化,探討胃泌素是否通過ERK1/2信號分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實現(xiàn)對大腸癌細胞增殖的調(diào)控,旨在進一步明確胃泌素調(diào)控大腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,為部分激素依賴性大腸癌的個體化治療提供理論依據(jù)。方法:通過慢病毒感染細胞構(gòu)建CCKBR陽性的細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株CACO2,應(yīng)用RTQ-PCR檢測大腸癌細胞株CACO2中胃泌素受體（CCKBR）的表達情況,通過MTT法觀察不同濃度五肽胃泌素對細胞生長的影響情況,由此確定五肽胃泌素作用于大腸癌細胞株CACO2濃度范圍,實驗共分四組:A組:為空白對照組,加入無血清培養(yǎng)基DMEM。B組:為陰性干擾組,無關(guān)陰性對照序列-shRNA轉(zhuǎn)染細胞,4-6小時后換1%胎牛血清培養(yǎng)基DMEM,再培養(yǎng)24h。C組:為胃泌素組,加入含胃泌素（25.00mg/L）培養(yǎng)基DMEM。D組:為轉(zhuǎn)染shRNA質(zhì)粒干擾+胃泌素組,4-6小時后換含胃泌素（25.00 mg/L）培養(yǎng)基DMEM,再培養(yǎng)24h。由上海吉凱基因構(gòu)建ERK1/2-shRNA,轉(zhuǎn)染后觀察轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
前言
研究材料和方法
    一、實驗材料
    二、試劑名稱及配制
    三、實驗方法
    四、統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝



本文編號：3391659