研究背景及目的:乳腺癌（Breast Cancer,BC）是全球女性最常見且死亡率最高的癌癥,三陰性乳腺癌（Triple-negative Breast Carcinomas,TNBC）缺乏ER、PR、HER2等常見靶向受體的表達(dá),具有更高的侵襲性及腫瘤微環(huán)境明顯的異質(zhì)性,相較于其它類型的BC,TNBC復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率更高,除常規(guī)的手術(shù)和化療,缺乏更有效的治療方法。腫瘤微環(huán)境中大部分免疫細(xì)胞是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-Associated Macrophages,TAMs）,其中M2型TAMs與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。脂氧素A4（Lipoxin A4,LXA4）在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用,BML-111為其最常見的類似物。目前為止,LXA4及其類似物BML-111對于TNBC的治療及作用尚未闡明,本實(shí)驗(yàn)擬研究BML-111對TNBC腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。我們推測BML-111能通過ILK通路抑制TAMs誘導(dǎo)的TNBC細(xì)胞EMT、遷移及轉(zhuǎn)移。方法:1、收集南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院2017.8.1-2019.10.1TNBC患者信息及標(biāo)本,檢測及對比有、無轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)灶... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HE染色及E-cadherin、CD68免疫組化表達(dá)在三陰性乳腺癌非轉(zhuǎn)移組的癌組織和轉(zhuǎn)移組織中有差異，TNBC腫瘤中央組織與周圍組織CD68表達(dá)有差異

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果193.2BML-111抑制TAMs誘導(dǎo)的MDA-MB-231和4T1細(xì)胞存活率我們通過MTT實(shí)驗(yàn)測定BML-111對TNBC細(xì)胞存活率的影響。預(yù)先設(shè)置了不同濃度的BML-111（100μg/L，200μg/L，400μg/L，800μg/L）處理TNBC細(xì)胞，觀察結(jié)果表明（圖2A、B），BML-111對TNBC細(xì)胞存活率影響呈濃度依賴性，且在BML-111濃度為800μg/L時(shí)對細(xì)胞的抑制率最高，因此在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中我們將采用此濃度。如圖2C、D所示，TAMs的上清液可增加細(xì)胞活性，但800μg/LBML-111仍能抑制TAMs誘導(dǎo)的MDA-MB-231和4T1細(xì)胞活性。然而，這種作用能被FPR2/ALX（LXA4的受體）的特異性抑制劑BOC-2阻斷，提示FPR2/ALX可能參與TAMs誘導(dǎo)MDA-MB-231和4T1細(xì)胞存活的機(jī)制。圖2A、B示BML-111濃度為800μg/L時(shí)對TNBC細(xì)胞抑制率最高（***P＜0.001）。C、D示BML-111抑制TAMs誘導(dǎo)的MDA-MB-231和4T1細(xì)胞存活率（****P<0.0001CMvs.CM+BML-111）。MTT實(shí)驗(yàn)之后，我們通過三維細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來研究BML-111對MDA-MB-231和4T1細(xì)胞長期作用。在用BML-111處理細(xì)胞24小時(shí)之后停藥，并于第7天觀察各組細(xì)胞狀態(tài)（如圖3所示）。CM+BML-111組較CM組細(xì)胞

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果20團(tuán)的形成明顯更少，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），CM組與Control組相比無明顯差異，但CM組細(xì)胞團(tuán)更大，由更多的細(xì)胞構(gòu)成。結(jié)果提示我們BML-111具有抑制TAMs誘導(dǎo)MDA-MB-231和4T1細(xì)胞三維培養(yǎng)中細(xì)胞簇的形成作用，這表明BML-111對TNBC細(xì)胞具有長期作用。圖3在三維細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中BML-111抑制TAMs誘導(dǎo)的MDA-MB-231和4T1細(xì)胞三維培養(yǎng)中細(xì)胞團(tuán)的形成作用3.3BML-111抑制TAMs誘導(dǎo)的MDA-MB-231和4T1細(xì)胞遷移能力我們按照實(shí)驗(yàn)擬行分組，進(jìn)行細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，用倒置顯微鏡拍攝不同條件培養(yǎng)0h及24h后的細(xì)胞，結(jié)果如圖3A1、A2所示。正常培養(yǎng)基培養(yǎng)的TNBC細(xì)胞加入BML-111后細(xì)胞遷移率降低，Control組vsBML-111組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），CM組較CM+BML-111組細(xì)胞遷移率顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但BOC-2能逆轉(zhuǎn)BML-111的這種作用。這表明BML-111具有抑制TNBC細(xì)胞遷移能力，尤其是對TAMS誘導(dǎo)后細(xì)胞抑制作用更明顯，BOC-2減弱了BML-111的作用。Transwell實(shí)驗(yàn)研究BML-111對TNBC細(xì)胞穿膜能力的作用。如圖3B1、B2所示，CM誘導(dǎo)后，MDA-MB-231和4T1細(xì)胞穿膜的細(xì)胞數(shù)增多，加入BML-111后，穿膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），加入BOC-2后，細(xì)胞數(shù)增多。這表明BML-111具有抑制TAMs誘導(dǎo)的MDA-MB-231和4T1細(xì)胞穿膜的作用，但該作用可被BOC-2抑制。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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