發(fā)布時間：2021-09-02 10:55

　　分子靶向治療是一種高效低毒的腫瘤治療方法,可顯著改善腫瘤患者的存活率和生存期。然而,其藥物療效因腫瘤個體差異而不同,發(fā)生耐藥性的患者將無法從靶向藥物中獲益。PIK3CA在多種人類腫瘤中具有較高的突變率,攜帶PIK3CA突變的患者會對抗EGFR或抗HER2靶向藥物耐藥,而對P13K抑制劑敏感。因此,PIK3CA突變檢測成為實現(xiàn)腫瘤個體化治療的重要預測因子。腫瘤基因突變多為發(fā)生在實體瘤中的體細胞突變,突變型DNA往往混雜在大量的野生型基因組背景中,給腫瘤基因突變檢測帶來了挑戰(zhàn)。因此,探索腫瘤稀有突變富集檢測技術(shù),提高檢測方法選擇性具有重要意義。本論文以PIK3CA突變檢測為研究對象,以提高突變檢測選擇性為研究目標,結(jié)合多色探針熔解曲線技術(shù)（Multicolor melting curve analysis,MMCA）和鎖核酸（Lockednucleic acid,LNA）修飾技術(shù),探索稀有突變富集檢測新方法,建立并比較了兩個PIK3CA突變檢測體系。第一個體系,在MMCA技術(shù)的基礎(chǔ)上,融入LNA修飾技術(shù),同時探針采用looping out設(shè)計,以提高探針對錯配堿基的敏感性,從而提高體系檢測... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＥｒｂＢ家族及其下游信號通路＾??Ｆｉｇ．１－１?ＥｒｂＢ?ｆａｍｉｌｙ?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??

結(jié)構(gòu)域ＡＢＤ?（ａｄａｐｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ），可與ｐ８５調(diào)節(jié)亞基結(jié)合；Ｒａｓ結(jié)合結(jié)構(gòu)域??ＲＢＤ（Ｒａｓ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ）；?Ｃ２結(jié)構(gòu)域，與細胞膜結(jié)合相關(guān)；螺旋結(jié)構(gòu)域（ｈｅｌｉｃａｌ??ｄｏｍａｉｎ）和激酶結(jié)構(gòu)域（ｋｉｎａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ）（如圖１．３）。尸ＺＯＣ４突變主要發(fā)生在外??顯子９上的螺旋結(jié)構(gòu)域和外顯子２０上的激酶結(jié)構(gòu)域上，提示這種非隨機性的高??頻突變與ＰＩ３Ｋ酶活性的相關(guān)性［１３］。其中外顯子９的Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ以及外顯子??２０的Ｈ１０４７Ｒ突變發(fā)生頻率最高，被稱為熱點突變（Ｈｏｔｓｐｏｔ?Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ），這三??種突變類型占據(jù)了所有幻Ｇ４基因突變的８０％左右。已有大量研究表明

?ｐａｔｈｗａｙｓ??ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｐａｔｈｗａｙｓ??圖１－２ＰＩ３Ｋ主要催化機制［ｕ］??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍａｉｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｃａｔａｌｙｓｅｄ?ｂｙ?ＰＩ３Ｋ??１．３ｉＹＴＯＣ４基因突變及其分子生物學意義??／＞／幻Ｃ４基因編碼ＩＡ類ＰＩ３Ｋ的ｐｌｌＯａ催化亞基，由Ｖｏｌｉｎｉａ在１９９４年利用??原位雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)［１２］，該基因位于３號染色體，全長３４?ｋｂ，包含２０個外顯子，??可編碼１０６８種氨基酸。研宄表明，ｐｌｌＯｃｔ蛋白包括５個結(jié)構(gòu)域，Ｎ端受體結(jié)合??結(jié)構(gòu)域ＡＢＤ?（ａｄａｐｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ），可與ｐ８５調(diào)節(jié)亞基結(jié)合；Ｒａｓ結(jié)合結(jié)構(gòu)域??ＲＢＤ（Ｒａｓ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ）；?Ｃ２結(jié)構(gòu)域，與細胞膜結(jié)合相關(guān)；螺旋結(jié)構(gòu)域（ｈｅｌｉｃａｌ??ｄｏｍａｉｎ）和激酶結(jié)構(gòu)域（ｋｉｎａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ）（如圖１．３）。尸ＺＯＣ４突變主要發(fā)生在外??顯子９上的螺旋結(jié)構(gòu)域和外顯子２０上的激酶結(jié)構(gòu)域上，提示這種非隨機性的高??頻突變與ＰＩ３Ｋ酶活性的相關(guān)性［１３］。其中外顯子９的Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ以及外顯子??２０的Ｈ１０４７Ｒ突變發(fā)生頻率最高，被稱為熱點突變（Ｈｏｔｓｐｏｔ?Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ），這三??種突變類型占據(jù)了所有幻Ｇ４基因突變的８０％左右。已有大量研究表明

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PIK3CA基因突變在結(jié)直腸癌中的研究進展[J]. 王麗麗,楚慧麗,畢經(jīng)旺.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2013(11)
[2]腫瘤基因檢測與分子靶向治療[J]. 張琨琨,輦偉奇.  檢驗醫(yī)學與臨床. 2012(22)
[3]肺癌患者血漿中APC基因啟動子甲基化定量檢測研究[J]. 潘世揚,謝而付,束永前,高麗,張麗霞,陳丹,陳進步,趙文君,穆原,張寄南.  癌癥. 2009(04)
[4]鎖核酸的特點及其應(yīng)用[J]. 李生茂,徐祥,梁華平,李磊.  生物化學與生物物理進展. 2003(03)

博士論文
[1]應(yīng)用單個鎖核酸修飾的探針提高對非互補雜交識別能力的研究[D]. 樸賢玉.中國醫(yī)科大學 2009



本文編號：3378883