目的:在本室已構(gòu)建Ad.RGD空載體和Ad.RGD-ING4重組腺病毒的基礎(chǔ)上,再構(gòu)建Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53單雙基因重組腺病毒,研究其對人肺腺癌細(xì)胞（A549）的體內(nèi)外抑制效應(yīng)及潛在分子機制。方法:PCR克隆獲得P53目的基因,在本室已成功構(gòu)建pAdTrack-CMV-PolyApromoter、pAdTrack-CMV-ING4-PolyA-promoter轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的基礎(chǔ)上,在多克隆酶切位點NotⅠ和XhoⅠ之間插入P53目的片段,構(gòu)建pAdTrack-CMV-PolyApromoter-P53和pAdTrack-CMV-ING4-PolyA-promoter-P53重組轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,再與RGD-4C修飾的腺病毒骨架質(zhì)粒pAdeasy-1.RGD同源重組,經(jīng)QBI-293A細(xì)胞包裝、擴(kuò)增和效價檢測后獲得高滴度重組腺病毒Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53。本項研究共分5組:PBS組、Ad.RGD空載對照組、Ad.RGD-ING4和Ad.RGD-P53單基因組、Ad.RGD-ING4-P53雙基因組。將上述各組重組腺病毒分別感染A549肺癌細(xì)胞... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 ING4或/和P53單雙基因重組腺病毒的構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 實驗結(jié)果
        2.1 P53基因克隆和單雙基因重組轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        2.2 RGD修飾的單雙基因同源重組腺病毒質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        2.3 各組重組腺病毒在QBI-293A細(xì)胞中的包裝
        2.4 各組重組腺病毒的效價檢測
        2.5 RT-PCR法鑒定ING4或/和P53單雙基因重組腺病毒的構(gòu)建
        2.6 Western Blot法鑒定ING4或/和P53基因在QBI-293A細(xì)胞中的蛋白表達(dá)
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 腺病毒介導(dǎo)ING4或/和P53基因表達(dá)對人肺腺癌細(xì)胞( A549)抑制作用的體外試驗研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2.實驗結(jié)果
        2.1 熒光顯微鏡觀察各組重組腺病毒感染A549肺癌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)GFP表達(dá)
        2.2 流式細(xì)胞儀檢測各組重組腺病毒對A549肺癌細(xì)胞的感染效率
        2.3 Western blot法鑒定ING4或/和P53基因在A549肺癌細(xì)胞中的蛋白表達(dá)
        2.4 MTT法檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞的生長抑制作用
        2.5 流式細(xì)胞儀雙染法檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞凋亡的影響
        2.6 Real time-PCR檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)水平的影響
        2.7 Western blot法檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞內(nèi)Bax、Bad、Bcl-xl蛋白表達(dá)水平的影響
        2.8 流式細(xì)胞儀單染法檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞周期的影響
        2.9 Real time-PCR檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞內(nèi)P21和Cyclin -E mRNA表達(dá)水平的影響
        2.10劃痕實驗鑒定ING4或/和P53基因表達(dá)對人肺腺癌細(xì)胞遷移能力的影響
        2.11 Transwell法檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對人肺癌細(xì)胞侵襲能力的影響
        2.12 Real time-PCR檢測ING4或/和P53基因表達(dá)對A549肺癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2 和MMP-9 mRNA表達(dá)水平的影響
    3.討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 腺病毒介導(dǎo)ING4或/和P53基因表達(dá)對裸鼠人肺腺癌移植瘤生長抑制效應(yīng)的體內(nèi)試驗研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 裸鼠人肺腺癌移植瘤模型的建立及成瘤率
        2.2 裸鼠體內(nèi)藥物實驗安全性觀察
        2.3 各組重組腺病毒對A549裸鼠人肺腺癌移植瘤的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)
        2.4 免疫組化檢測ING4或/和P53基因表達(dá)在裸鼠體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)的分子機制
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
綜述：ING4與P53的結(jié)合對腫瘤的影響
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間本人公開出版或發(fā)表的論著、論文
本論文受下列課題資助
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]p53基因在肺癌研究中的進(jìn)展[J]. 張麗華,侯振江.  臨床肺科雜志. 2006(01)
[7]中國12市縣1993年～1997年腫瘤發(fā)病和死亡登記資料統(tǒng)計分析[J]. 李連弟,饒克勤,張思維,魯鳳珠,鄒小農(nóng).  中國腫瘤. 2002(09)
[8]肺癌發(fā)病趨勢及分析[J]. 林小萍,王慶生,劉新民.  天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2000(02)

博士論文
[1]腺病毒介導(dǎo)的ING4和IL-24共表達(dá)對肝癌的抑瘤增效和化療增敏效應(yīng)及分子機制[D]. 謝宇鋒.蘇州大學(xué) 2009



本文編號：3376747