目的:DRAK1即絲/蘇氨酸激酶17A（STK17A）,是一種普遍表達的激酶,最初被認定為是細胞凋亡的調(diào)節(jié)因子。其在惡性腫瘤中的表達及生物學功能是局限的,并且其在非小細胞肺癌中的角色仍有待證實。本文旨在探究DRAK1在非小細胞肺癌中的表達,生物學功能并初步探索相關的分子機制。研究方法:1.采用免疫組織化學染色的實驗方法檢測非小細胞肺癌（NSCLC）組織和周圍正常組織內(nèi)DRAK1的表達水平和分布情況,并對其與臨床病理因素及臨床預后所存在的關聯(lián)進行分析。2.采用免疫印跡實驗方法檢測DRAK1在NSCLC新鮮組織及配對正常癌旁組織中的表達。3.采用免疫印跡及免疫熒光的實驗方法研究肺癌細胞系中DRAK1的表達及定位情況。4.通過細胞劃痕實驗和基質(zhì)膠侵襲實驗研究DRAK1對肺癌細胞遷移及侵襲能力的影響。5.通過細胞系轉(zhuǎn)染實驗在A549細胞系中上調(diào)DRAK1的表達,在LK2細胞系中下調(diào)DRAK1的表達研究細胞侵襲及EMT相關蛋白的變化情況。6.采用免疫熒光及免疫沉共沉淀的實驗方法確定與DRAK1存在共定位并結(jié)合的蛋白。結(jié)果:1.DRAK1在NSCLC胞漿中高表達,在其他癌旁正常肺組織內(nèi)低表達。胞漿... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：35 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DRAK1在正常組織及NSCLC中的表達及定位A.DRAK1在正常支氣管上皮組織中弱表達B.DRAK1在正常腺體中弱表達

中國醫(yī)科大學碩士學位論文8表1.104例非小細胞肺癌中DRAK1的過表達與臨床病理參數(shù)的關聯(lián)參數(shù)病例數(shù)DRAK1漿表達陰性陽性p*X2總數(shù)年齡1045351<553516190.2900.581≥55693732性別男6836320.3080.364女361719組織學類型鱗癌4527180.0792.593腺癌592633分級高-中分化7542332.7320.076低分化291118TNM分期Ⅰ+Ⅱ5839190.00013.907Ⅲ+Ⅳ461432淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有4518270.0393.814無593524圖1.2DRAK1陰性患者與DRAK1陽性患者的生存分析生存分析顯示DRAK1陽性表達的患者中位生存時間明顯短于DRAK1陰性表達的患者,差異具有統(tǒng)計學意義(*P<0.05)。

中國醫(yī)科大學碩士學位論文9圖1.3DRAK1在非小細胞肺癌新鮮組織對中的表達情況免疫印跡結(jié)果顯示，DRAK1在非小細胞肺癌組織中表達顯著高于癌旁正常肺組織(**P<0.01)3.2DRAK1促進NSCLC細胞的遷移、侵襲并上調(diào)EMT相關蛋白的表達為了探討DRAK1在肺癌細胞中的生物學功能，我們首先檢測了在正常支氣管上皮細胞HBE和A549、H1299、PC9、H460、H661、LK2和SK在內(nèi)的七種肺癌細胞系中DRAK1的表達，WB結(jié)果顯示在LK2、PC9、A549、H460、H661肺癌細胞系中DRAK1的表達顯著高于HBE、H1299、SK細胞系(P<0.05)(如圖2.1A)。免疫熒光實驗結(jié)果顯示DRAK1主要定位在胞質(zhì)中(如圖2.1B)。我們選擇肺腺癌細胞系A549和肺鱗癌細胞系LK2進行接下來的實驗，在A549細胞系中轉(zhuǎn)染DRAK1cDNA上調(diào)DRAK1表達水平，LK2細胞系中轉(zhuǎn)染siRNA下調(diào)DRAK1表達水平。轉(zhuǎn)染效率應用WB在A549、LK2細胞系中得到驗證(如圖2.2A)。通過細胞劃痕實驗研究肺癌細胞遷移能力，發(fā)現(xiàn)相對于對照組細胞，DRAK1上調(diào)促進A549細胞遷移(P<0.05)，而DRAK1的下調(diào)抑制LK2細胞遷移(P<0.05)(如圖2.2B)�；|(zhì)膠侵襲實驗分析肺癌細胞侵襲能力，結(jié)果顯示與對照細胞相比，DRAK1上調(diào)促進A549細胞侵襲(P<0.05),DRAK1的下調(diào)抑制LK2細胞侵襲(P<0.05)(如圖2.2C)。EMT對癌細胞轉(zhuǎn)移有著極其重要的影響。隨著DRAK1的過表達，N-cadherin、snail、slug的表達水平升高而E-cadherin降低，侵襲相關蛋白matrixmetalloproteinase(MMP)9及(MMP)7表達水平升高,而DRAK1敲低出現(xiàn)相反的結(jié)果(如圖2.2D)。


本文編號：3367648