目的:DRAK1即絲/蘇氨酸激酶17A（STK17A）,是一種普遍表達(dá)的激酶,最初被認(rèn)定為是細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)因子。其在惡性腫瘤中的表達(dá)及生物學(xué)功能是局限的,并且其在非小細(xì)胞肺癌中的角色仍有待證實(shí)。本文旨在探究DRAK1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá),生物學(xué)功能并初步探索相關(guān)的分子機(jī)制。研究方法:1.采用免疫組織化學(xué)染色的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織和周圍正常組織內(nèi)DRAK1的表達(dá)水平和分布情況,并對(duì)其與臨床病理因素及臨床預(yù)后所存在的關(guān)聯(lián)進(jìn)行分析。2.采用免疫印跡實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)DRAK1在NSCLC新鮮組織及配對(duì)正常癌旁組織中的表達(dá)。3.采用免疫印跡及免疫熒光的實(shí)驗(yàn)方法研究肺癌細(xì)胞系中DRAK1的表達(dá)及定位情況。4.通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)研究DRAK1對(duì)肺癌細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響。5.通過(guò)細(xì)胞系轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)在A549細(xì)胞系中上調(diào)DRAK1的表達(dá),在LK2細(xì)胞系中下調(diào)DRAK1的表達(dá)研究細(xì)胞侵襲及EMT相關(guān)蛋白的變化情況。6.采用免疫熒光及免疫沉共沉淀的實(shí)驗(yàn)方法確定與DRAK1存在共定位并結(jié)合的蛋白。結(jié)果:1.DRAK1在NSCLC胞漿中高表達(dá),在其他癌旁正常肺組織內(nèi)低表達(dá)。胞漿... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：35 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DRAK1在正常組織及NSCLC中的表達(dá)及定位A.DRAK1在正常支氣管上皮組織中弱表達(dá)B.DRAK1在正常腺體中弱表達(dá)

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文8表1.104例非小細(xì)胞肺癌中DRAK1的過(guò)表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)參數(shù)病例數(shù)DRAK1漿表達(dá)陰性陽(yáng)性p*X2總數(shù)年齡1045351<553516190.2900.581≥55693732性別男6836320.3080.364女361719組織學(xué)類型鱗癌4527180.0792.593腺癌592633分級(jí)高-中分化7542332.7320.076低分化291118TNM分期Ⅰ+Ⅱ5839190.00013.907Ⅲ+Ⅳ461432淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有4518270.0393.814無(wú)593524圖1.2DRAK1陰性患者與DRAK1陽(yáng)性患者的生存分析生存分析顯示DRAK1陽(yáng)性表達(dá)的患者中位生存時(shí)間明顯短于DRAK1陰性表達(dá)的患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P<0.05)。

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文9圖1.3DRAK1在非小細(xì)胞肺癌新鮮組織對(duì)中的表達(dá)情況免疫印跡結(jié)果顯示，DRAK1在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)顯著高于癌旁正常肺組織(**P<0.01)3.2DRAK1促進(jìn)NSCLC細(xì)胞的遷移、侵襲并上調(diào)EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)為了探討DRAK1在肺癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能，我們首先檢測(cè)了在正常支氣管上皮細(xì)胞HBE和A549、H1299、PC9、H460、H661、LK2和SK在內(nèi)的七種肺癌細(xì)胞系中DRAK1的表達(dá)，WB結(jié)果顯示在LK2、PC9、A549、H460、H661肺癌細(xì)胞系中DRAK1的表達(dá)顯著高于HBE、H1299、SK細(xì)胞系(P<0.05)(如圖2.1A)。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DRAK1主要定位在胞質(zhì)中(如圖2.1B)。我們選擇肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和肺鱗癌細(xì)胞系LK2進(jìn)行接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)，在A549細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染DRAK1cDNA上調(diào)DRAK1表達(dá)水平，LK2細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染siRNA下調(diào)DRAK1表達(dá)水平。轉(zhuǎn)染效率應(yīng)用WB在A549、LK2細(xì)胞系中得到驗(yàn)證(如圖2.2A)。通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)研究肺癌細(xì)胞遷移能力，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于對(duì)照組細(xì)胞，DRAK1上調(diào)促進(jìn)A549細(xì)胞遷移(P<0.05)，而DRAK1的下調(diào)抑制LK2細(xì)胞遷移(P<0.05)(如圖2.2B)。基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)分析肺癌細(xì)胞侵襲能力，結(jié)果顯示與對(duì)照細(xì)胞相比，DRAK1上調(diào)促進(jìn)A549細(xì)胞侵襲(P<0.05),DRAK1的下調(diào)抑制LK2細(xì)胞侵襲(P<0.05)(如圖2.2C)。EMT對(duì)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移有著極其重要的影響。隨著DRAK1的過(guò)表達(dá)，N-cadherin、snail、slug的表達(dá)水平升高而E-cadherin降低，侵襲相關(guān)蛋白matrixmetalloproteinase(MMP)9及(MMP)7表達(dá)水平升高,而DRAK1敲低出現(xiàn)相反的結(jié)果(如圖2.2D)。


本文編號(hào)：3367648