目的:前期體內(nèi)、體外研究均表明,來源于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的微囊（h WJMSCs-MVs）可以有效的抑制膀胱腫瘤細(xì)胞（T24細(xì)胞）生長(zhǎng),但具體機(jī)制仍未明確。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞微囊作用于膀胱腫瘤細(xì)胞后觀察膀胱腫瘤細(xì)胞內(nèi)自噬水平的變化,研究微囊對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞自噬的影響及自噬體與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系,并探討其中可能影響到的信號(hào)通路。方法:（1）細(xì)胞培養(yǎng):通過獲得參與者知情同意后,將獲取的新鮮臍帶在無(wú)菌條件下進(jìn)行貼壁原代培養(yǎng),在標(biāo)準(zhǔn)的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞待融合到80-90%時(shí),采用1:2的比例對(duì)原代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行傳代。細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定后,取第3-6代進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（2）微囊的提取及鑒定:取3-6代生長(zhǎng)旺盛且細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定的h WJMSCs,采用高速離心法提取微囊后,采用流式細(xì)胞儀對(duì)分離的微囊（MVs）進(jìn)行鑒定,而后采用Bradford法對(duì)收集的微囊進(jìn)行蛋白定量,并應(yīng)用透射電鏡h WJMSC-MVs觀察微囊的大小及形態(tài)。（3）hWJMSC-MVs對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響:應(yīng)用h WJMSC-MVs處理膀胱腫瘤細(xì)胞后,透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬體數(shù)量變化,Western Blot檢測(cè)自噬體相關(guān)蛋... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：37 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 材料與試劑
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)試劑
    1.3 主要抗體
    1.4 實(shí)驗(yàn)耗材和儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    2.1人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定分析
    2.2 T24細(xì)胞復(fù)蘇
    2.3 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
    2.4 細(xì)胞凍存
    2.5 hWJMSC-MVs的制備
    2.6 hWJMSC-MVs的電鏡鑒定
    2.7 膀胱腫瘤細(xì)胞自噬體變化的透視電鏡檢測(cè)
    2.8 蛋白印跡法（Western blot）檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞株蛋白表達(dá)水平
        2.8.1 蛋白抽提及蛋白濃度測(cè)定
        2.8.2 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
        2.8.3 免疫印跡
    2.9 膀胱腫瘤細(xì)胞凋亡檢測(cè)
    2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
3 結(jié)果
    3.1 hWJMSC-MVs分離及鑒定
    3.2 hWJMSC-MVs明顯誘導(dǎo)T24細(xì)胞自噬體生成
    3.3 hWJMSC-MVs通過AKT/m TOR誘導(dǎo)T24細(xì)胞自噬及相關(guān)信號(hào)通路的變化
    3.4 3-MA抑制T24細(xì)胞自噬后Western blot檢測(cè)再次監(jiān)測(cè)MVs作用的膀胱癌細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)基因的表達(dá)
    3.5 3-MA抑制T24細(xì)胞的自噬的電鏡變化
    3.6 3-MA抑制T24細(xì)胞的自噬， hWJMSC-MVs對(duì)T24細(xì)胞凋亡的變化
4 討論
5 結(jié)論
References
自噬介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的生存和死亡（綜述）
    References
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3367477