肺癌（lung cancer, LC）是全球最常見的惡性程度較高的原發(fā)性腫瘤。據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計資料顯示,2012年全世界新增癌癥患者大約有1410萬例,其中肺癌患者有180萬人,占癌癥新增病例的13%。肺癌是全球男性癌癥中發(fā)病率和死亡率最高、也是發(fā)達(dá)國家女性癌癥死亡率最高的疾病。在云南宣威、富源等地,肺癌的發(fā)病率在全國所有城市中排在首位,并具有女性的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于男性的特點。而針對宣威肺癌發(fā)病原因的大量研究結(jié)果顯示,導(dǎo)致肺癌高發(fā)的環(huán)境原因主要是使用當(dāng)?shù)爻霎a(chǎn)的煙煤所造成的室內(nèi)空氣以及大氣污染,其中包含主要的環(huán)境致癌物多環(huán)芳烴。由于環(huán)境污染的加劇和人口的快速增長以及老齡化等因素的作用,加之臨床缺乏有效的肺癌早期診斷的生物標(biāo)志物,使得大多數(shù)肺癌患者在確診時已是中晚期。進(jìn)而導(dǎo)致肺癌的發(fā)病率和死亡率仍在逐年增加,其五年生存率已不足17%。因此,開發(fā)有效的早期診斷的生物標(biāo)志物對于肺癌的早發(fā)現(xiàn)早治療至關(guān)重要,是改善肺癌預(yù)后和提高生存率的關(guān)鍵。研究表明,人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與異常的DNA甲基化具有顯著的相關(guān)性,并且腫瘤相關(guān)基因的甲基化異�，F(xiàn)象在細(xì)胞癌變之前就已經(jīng)發(fā)生了,能夠作為很好的腫瘤篩查和早期... 

【文章來源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略表
第一章 緒論
    1.1 癌癥及肺癌的現(xiàn)狀
    1.2 肺癌的分類和分期
    1.3 肺癌的早期診斷和治療方法
        1.3.1 肺癌的早期診斷
        1.3.2 肺癌的治療方法
    1.4 表觀遺傳學(xué)和DNA甲基化
        1.4.1 表觀遺傳學(xué)
        1.4.2 DNA甲基化
        1.4.3 DNA甲基化的檢測方法
        1.4.4 DNA甲基化和腫瘤
    1.5 環(huán)境致癌因素
        1.5.1 環(huán)境致癌因素種類
        1.5.2 多環(huán)芳烴類物質(zhì)對肺癌的危害
        1.5.3 BPDE-DNA加合物的檢測方法
    1.6 云南宣威肺癌的概述
    1.7 本課題的研究目的及意義
第二章 肺癌組織中RASSF1A和TBX5基因甲基化的檢測
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗樣本和細(xì)胞
        2.2.2 實驗主要耗材
        2.2.3 實驗主要試劑
        2.2.4 主要實驗儀器
        2.2.5 主要試劑配置方法
    2.3 實驗方法
        2.3.1 肺癌組織樣本收集
        2.3.2 A549細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.3 石蠟包埋與切片
        2.3.4 HE染色
        2.3.5 FFPE組織DNA提取
        2.3.6 核酸定量
        2.3.7 重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化
        2.3.8 普通PCR
        2.3.9 瓊脂糖凝膠電泳
        2.3.10 PCR產(chǎn)物純化
        2.3.11 基因克隆
        2.3.12 菌落PCR
        2.3.13 測序結(jié)果分析
        2.3.14 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 實驗結(jié)果和討論
        2.4.1 肺癌組織樣本統(tǒng)計
        2.4.2 肺癌FFPE組織DNA提取
        2.4.3 RASSF1A/TBX5基因啟動子預(yù)測和引物設(shè)計
        2.4.4 RASSF1A/TBX5目的基因擴(kuò)增和克隆
        2.4.5 重亞硫酸鹽測序結(jié)果
        2.4.6 RASSF1A/TBX5基因在所有肺癌樣本中的甲基化頻率
        2.4.7 RASSF1A/TBX5基因在肺癌和癌旁組織中的甲基化水平
        2.4.8 RASSF1A/TBX5基因的CpG位點甲基化情況
        2.4.9 RASSF1A/TBX5基因甲基化和肺癌臨床特征的相關(guān)性分析
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 BPDE-DNA加合物在肺癌組織中的檢測
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 主要實驗耗材
        3.2.2 主要實驗儀器
        3.2.3 主要實驗試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 免疫熒光
        3.3.2 分析方法
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 BPDE-DNA加合物在肺癌組織細(xì)胞中的定位
        3.4.2 BPDE-DNA加合物與肺癌患者臨床特征的相關(guān)性分析
        3.4.3 肺癌中BPDE-DNA加合物和DNA甲基化之間的關(guān)系
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第四章 總結(jié)和展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]宣威肺癌的致病環(huán)境因子研究和診治進(jìn)展[J]. 任永永,孔祥陽,伍超群,呂云輝.  腫瘤. 2015(04)
[2]宣威女性肺癌患者肺組織中PAHS-DNA加合物的表達(dá)[J]. 楊凱云,黃云超,趙光強(qiáng),雷玉潔,王昆.  中國肺癌雜志. 2010(05)
[3]肺癌的治療現(xiàn)狀[J]. 白春學(xué),張新.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2006(03)
[4]三種肺癌組織學(xué)分類比較[J]. 李維華.  中國肺癌雜志. 2000(06)



本文編號：3362592