第一部分:蛋白酶活化受體2調控結直腸癌細胞Bcl-xL的分子機制和功能研究Bcl-xL是Bcl-2蛋白家族中的抗凋亡蛋白之一,在調控細胞凋亡、細胞自噬和腫瘤代謝等方面都具有重要作用。有大量研究報道Bcl-xL在結直腸癌中高表達,但是關于其在結直腸癌中高表達的分子機制卻不明了。另一方面,腸道存在其特有的微環(huán)境,腸道中含有豐富的胰蛋白酶類,能夠激活細胞膜上的一個七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體蛋白酶活化受體2（protease-activated receptor 2,PAR2）。本研究的目的是:明確PAR2信號是否調控Bcl-xL的表達,研究其調控的分子機制并初步探索其在結直腸癌治療中潛在的應用價值。首先我們發(fā)現(xiàn)在多個結直腸癌的數(shù)據(jù)庫和細胞系中Bcl-xL與PAR2的表達水平呈顯著正相關。特異性激活PAR2信號通路可以顯著上調多個細胞系中Bcl-xL的蛋白表達水平,而非mRNA水平。進一步的研究發(fā)現(xiàn)激活PAR2顯著延長了 Bcl-xL蛋白的半衰期,而抑制該通路則顯著增加了Bcl-xL蛋白的降解。此外,只有蛋白酶體抑制劑,而非溶酶體和caspase的抑制劑,可以阻斷PAR2缺失導致的Bcl-xL蛋... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．數(shù)據(jù)庫來源的結直腸癌臨床樣本中ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的ｍＲＮＡ表達水平顯著正相關

２０１５），因此我們還檢測了上述細胞系中胰蛋白酶原（Ｔｒｙｐｓｉｎｏｇｅｎ）和ＫＬＫ１４的??ｍＲＮＡ表達量。對結果進行定量分析發(fā)現(xiàn)ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平在這些細??胞系中也是顯著正相關（圖２，?ｐ＜０．０５）。以上結果提示我們，ＰＡＲ２有可能調??控Ｂｃｌ－ｘＬ的表達。??３９??

Ｃａｃｏ－２還是在研宄ＰＡＲ２的經(jīng)典細胞模型Ａ５４９中，亦或是在代表正常上皮細??胞的ＨＥＫ－２９３／ＨＥＫ－２９３Ｔ中，ＰＡＲ２－ＡＰ處理之后都能夠顯著增加Ｂｄ－ｘＬ的蛋??白水平（圖３），提示激活ＰＡＲ２能夠上調Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。??Ａ?Ｂ??Ａ５４９?ＰＡＲ２－ＡＰ??（ａｃｏ－２?ＰＡＲ２－ＡＰ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ?？?．．??Ｂｄ－ｘＬ?１?｜?Ｂ叫?一?一一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－???＜１?一十?＞、■?，一％—？??Ｃ?Ｄ??ＨＥＫ?２９３?ＰＡＲ２?ＡＰ?ＨＥＫ?２９３ＴＰＡＲ２?ＡＰ??ｃｏｎ?ｉｂ?２ｂ?３ｂ?４ｈ?ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ??｜＜—？?ｍｔｍ?ｍａｍ?ｂｃｉ—ｘｌ?｜?｜??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｊ?＾?｜?Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－?ｊ??圖３．在不同的細胞系中激活ＰＡＲ２都能顯著增加Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｃａｃｏ－２、Ａ５４９、??ＨＥＫ－２９３和ＨＥＫ－２９３Ｔ（圖Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）分別用無血清培養(yǎng)基饑餓過夜后，加入１０〇ｎＭＰＡＲ２??特異性激活肽（ＰＡＲ２－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ＰＡＲ２－ＡＰ）處理Ｍ小時后裂解細胞提取總蛋白，??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｐ－ａｃｔｉｎ作為蛋白內參。??４０??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



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