背景:肝細胞癌（Hepatocelluar carcinoma,HCC）發(fā)生迅速,惡性程度非常高,預(yù)后極差。雖然目前肝癌的治療手段不斷進步,但每年仍有約75萬人死于HCC。因此,揭示其潛在發(fā)病機制對于提高治療效率尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)多種長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNAs,lncRNAs）在肝癌中表達失調(diào),其異常表達與腫瘤相關(guān)。目前已有研究報道lncRNA-結(jié)直腸腫瘤差異表達基因（colorectal neoplasia differentially expressed,CRNDE）在HCC中表達升高,但是其在HCC中的作用及具體分子機制尚不十分明確。目的:1.明確CRNDE在HCC中的作用。2.明確CRNDE與鄰近基因IRX5的關(guān)系以及IRX5的生物學(xué)功能。3.闡明CRNDE調(diào)控IRX5的表達而行使其生物學(xué)作用的分子機制。方法:第一部分:CRNDE在肝癌中的表達及其生物學(xué)功能研究1.FISH技術(shù)檢測CRNDE的定位情況。2.QRT-PCR檢測肝癌組織和肝癌細胞系中CRNDE的表達。3.在肝癌細胞中轉(zhuǎn)染CRNDE過表達質(zhì)粒和感染sh-CRNDE慢病毒。克隆形成、MT... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

QRT-PCR分析CRNDE在肝癌組織與癌旁組織中的表達差異（N:癌旁組織，T:腫瘤組織）

T- PCR 分析 CRNDE 在肝癌細胞系與 L02 細胞中的表達rent expressions of CRNDE in HCC cell lines and L02 cellby qRT-PCR.胞內(nèi)定位 lncRNA 依賴于其細胞定位而發(fā)揮作用，據(jù)此，我 在肝癌細胞內(nèi)的定位情況。結(jié)果顯示，在肝癌細 1.3)。E 干擾效率最佳的干擾序列 4 條干擾序列(shRNA1-shRNA4)及 sh-NC 序列轉(zhuǎn)染集病毒液。然后將病毒液分別感染 SMMC7721 和方法檢測每條 shRNA 對 CRNDE 的干擾效果序列的干擾效果最為明顯（P<0.01）（圖 1.4）sh-CRNDE)進行下一步實驗。

41圖 1.4 QRT-PCR 檢測不同序列的 CRNDE-shRNA 干擾效果(**P<0.01)Figure 1.4 Interference effect of different CRNDE-shRNAs were analyzed byqRT-PCR(**P<0.01).2.5 驗證 CRNDE 過表達轉(zhuǎn)染效率將 pcDNA3.1-CRNDE 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 SMMC7721 和 HepG2 細胞后， 48ｈ后，提取細胞總 RNA。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染了 pcDNA3.1-CRNDE 質(zhì)粒的兩種細胞中的CRNDE 表達明顯升高，證明 CRNDE 過表達成功（圖 1.5）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]lncRNA作為競爭性內(nèi)源RNA調(diào)控肝癌及中藥作用機制研究進展[J]. 史苗娟,郭鑫昕,商嘉瑋,蘇式兵,張輝.  上海中醫(yī)藥雜志. 2017(11)
[2]《肝細胞癌外科治療方法的選擇專家共識》解讀[J]. 陳孝平,張志偉.  中華外科雜志. 2017 (01)
[3]Molecular targeted therapy for hepatocellular carcinoma:Current and future[J]. Jung Woo Shin,Young-Hwa Chung.  World Journal of Gastroenterology. 2013(37)



本文編號：3349728