[目 的]研究miR-34a在體外和體內(nèi)對肺腺癌細(xì)胞侵襲、遷移、增殖及克隆等惡性生物學(xué)行為的影響,以及miR-34a在肺腺癌惡性生物學(xué)行為中的可能靶點(diǎn),并在組織樣本層面驗(yàn)證miR-34a、MTA2、FOXM1的表達(dá)量及miR-34a與MTA2、FOXM1的相關(guān)性。[方法]1、通過生物合成劑miR-34a-mimics過表達(dá)miR-34a,通過CCK實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞克隆、增殖形成能力,綜合評價(jià)miR-34a對肺腺癌A549、XWLC-05細(xì)胞克隆、增殖能力的影響。2、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)評價(jià)miR-34a對肺腺癌細(xì)胞A549、XWLC-05細(xì)胞遷移能力的影響。3、Transwel l侵襲實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞侵襲能力,評價(jià)mi R-34a對肺腺癌細(xì)胞A549、XWLC-05細(xì)胞侵襲能力的影響。4、通過生物信息學(xué)分析,初步篩選出MYC、MTA2、FOXM1、FOXP1、MDM4、MYB、ULBP2、SIRT1這八個(gè)與miR-34a相關(guān)性較大的靶基因,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-qPCR）檢測miR-34a、MYC、MTA2、FOXM1、FOXP1、... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ａ：?ｍｉｍｉｃｓ轉(zhuǎn)染肺腺癌ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞４８ｈ后ＧＦＰ熒光表達(dá)圖１００Ｘ??

Ａ?Ｂ??Ａ５４９?ＸＷＬＣ－０５??１５－，?．．．?１Ｓｉ??５?ｍｉｒ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ?ｃ?ｍｉｒ－３４ａ－ｍｉｍ＇ｃｓ??＇？Ｓ?ＮＣ?｜?／?ＮＣ??§１０．?－ＢＬＡＮＫ?－１〇．?／／?令?ＢＬＡＮＫ??〇?１?ｉ?ｉ?ｉ?■?ｉ?ｉ?〇?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｒ??Ｎ?＜Ｖ?Ｖ?＾?Ｋ?＜Ｖ?Ｖ?？）?ｆｃ??Ｔｉｍｅ?二?Ｄａｙ?匚?ＴｉｍｅｃＤａｙ］??圖３?Ａ?ＣＣＫ－８方法檢測ｍｉＲ－３４ａ對Ａ５４９細(xì)胞增殖能力的影響??圖３?Ｂ?ＣＣＫ－８方法檢測ｍｉＲ－３４ａ對ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞增殖能力的影響??３．?ｍｉＲ－３４ａ可抑制Ａ５４９、ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞的侵襲能力??本實(shí)驗(yàn)采用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵襲法以Ｍａｔｒｉｇｅｌ膠來模擬體內(nèi)基底膜成分，通過此方??法檢測空白組、ＮＣ組、ｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ組細(xì)胞的侵襲能力；如圖４所示，各組??穿透細(xì)胞數(shù)分別為：Ａ５４９細(xì)胞：空白組（９６０．?４?±?２１．?１７?Ｎ＝５）?／ＨＰ；?ＮＣ組（９９６．?？??±?３３．５６?Ｎ＝５）／ＨＰ；ｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ?組（２７９．８?±?２１．５６?Ｎ＝５）／ＨＰＱｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ??組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著低于空白組及ＮＣ組（Ｐ＜０．?０５），空白組與ＮＣ組間侵襲細(xì)胞數(shù)??差異無顯著性（Ｐ＞〇．?０５）。??ＸＷＬＣ－０５?細(xì)胞：空白組（２５３．?０?±?１１．?５８?Ｎ＝５）?／ＨＰ；?ＮＣ?組（２７６．?８?±?５．?４２６?Ｎ＝５）??／ＨＰ；?ｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ?組（６５．?６０?±?１．６３１?Ｎ＝５）?

－議＿＿??馨學(xué)：懸獨(dú)＇??ｘ－。５，顏｜＿響祕?＜量??＾＾ＳＭ．隨趨??ＢＬＡＮＫ?組?ＮＣ?組?ｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｎｉｃｓ?組??Ａ?Ｂ??ｐ＜?０．０００１?Ｐ＜?０．０００１??Ｍ?二Ｔ?：ｒＫ?，１?￡ｊ￡�。�！?＝ｒＫ??Ｓ?１０００?■?－ｎｒ＊?■?ｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ?ｇ?—ｊ—?■?ｍＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ??ｊ：＿＊?丨：ｌ??／……／??／■?ＸＷＬＣ－０５??圖４?Ａ?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵襲實(shí)驗(yàn)檢測ｍｉＲ－３４ａ對Ａ５４９細(xì)胞侵襲能力的影響??圖４?Ｂ?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵襲實(shí)驗(yàn)檢測ｍｉＲ＿３４ａ對ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞侵襲能力的影響??４．?ｍｉＲ－３４ａ可抑制Ａ５４９、ＸＷＬＣ－０５細(xì)胞的遷移能力（劃痕實(shí)驗(yàn)）??細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)用來觀察各組細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力變化。我們通過測量細(xì)胞向劃??痕區(qū)的遷移距離來評估其遷移運(yùn)動(dòng)能力。如圖５所示，我們進(jìn)行了?ＸＷＬＣ－０５和??Ａ５４９細(xì)胞：空白組、ＮＣ組、ｍｉＲ－３４ａ－ｍｉｍｉｃｓ組的劃痕實(shí)驗(yàn)。劃痕后２４ｈ、４８ｈ、??７２ｈ觀察細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)情況，實(shí)驗(yàn)重復(fù)３次。用ｉｍａｇｅｊ分析劃痕面積，劃痕??愈合率計(jì)算公式為（原始面積－時(shí)間點(diǎn)面積）／原始面積。??Ａ５４９細(xì)胞：空白組平均向劃痕區(qū)遷移率為（０．２６２７?±?０．００４７１２?Ｎ＝３）?％，??ＮＣ組平均向劃痕區(qū)遷移率為（０．２６６４?±?０．００１１８３?Ｎ＝３）?％；兩組間差異無顯??著性（Ｐ＞０．?０５）。而高表達(dá)ｍｉＲ－３４ａ的ｍｉＲ－３４ａ＿ｍｉｍｉｃｓ組細(xì)胞平均向劃痕區(qū)遷??移率為（０．２５０２?±?０．００３２３５?Ｎ＝３）?％，稍低于空白組和ＮＣ組


本文編號：3341611