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miR-34a通過調(diào)控FOXM1及MTA2對肺腺癌惡性生物學(xué)行為的影響

發(fā)布時間:2021-08-14 02:44
  [目 的]研究miR-34a在體外和體內(nèi)對肺腺癌細(xì)胞侵襲、遷移、增殖及克隆等惡性生物學(xué)行為的影響,以及miR-34a在肺腺癌惡性生物學(xué)行為中的可能靶點,并在組織樣本層面驗證miR-34a、MTA2、FOXM1的表達量及miR-34a與MTA2、FOXM1的相關(guān)性。[方法]1、通過生物合成劑miR-34a-mimics過表達miR-34a,通過CCK實驗、平板克隆形成實驗比較各組細(xì)胞克隆、增殖形成能力,綜合評價miR-34a對肺腺癌A549、XWLC-05細(xì)胞克隆、增殖能力的影響。2、細(xì)胞劃痕實驗、Transwell遷移實驗評價miR-34a對肺腺癌細(xì)胞A549、XWLC-05細(xì)胞遷移能力的影響。3、Transwel l侵襲實驗檢測各組細(xì)胞侵襲能力,評價mi R-34a對肺腺癌細(xì)胞A549、XWLC-05細(xì)胞侵襲能力的影響。4、通過生物信息學(xué)分析,初步篩選出MYC、MTA2、FOXM1、FOXP1、MDM4、MYB、ULBP2、SIRT1這八個與miR-34a相關(guān)性較大的靶基因,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-qPCR)檢測miR-34a、MYC、MTA2、FOXM1、FOXP1、... 

【文章來源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】:73 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

miR-34a通過調(diào)控FOXM1及MTA2對肺腺癌惡性生物學(xué)行為的影響


圖1?A:?mimics轉(zhuǎn)染肺腺癌XWLC-05細(xì)胞48h后GFP熒光表達圖100X??

細(xì)胞增殖,方法,細(xì)胞,空白


A?B??A549?XWLC-05??15-,?...?1Si??5?mir-34a-mimics?c?mir-34a-mim'cs??'?S?NC?|?/?NC??§10.?-BLANK?-1〇.?//?令?BLANK??〇?1?i?i?i?■?i?i?〇?i?i?i?i?i?r??N?<V?V?^?K?<V?V??)?fc??Time?二?Day?匚?TimecDay]??圖3?A?CCK-8方法檢測miR-34a對A549細(xì)胞增殖能力的影響??圖3?B?CCK-8方法檢測miR-34a對XWLC-05細(xì)胞增殖能力的影響??3.?miR-34a可抑制A549、XWLC-05細(xì)胞的侵襲能力??本實驗采用Transwell侵襲法以Matrigel膠來模擬體內(nèi)基底膜成分,通過此方??法檢測空白組、NC組、miR-34a-mimics組細(xì)胞的侵襲能力;如圖4所示,各組??穿透細(xì)胞數(shù)分別為:A549細(xì)胞:空白組(960.?4?±?21.?17?N=5)?/HP;?NC組(996.????±?33.56?N=5)/HP;miR-34a-mimics?組(279.8?±?21.56?N=5)/HPQmiR-34a-mimics??組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著低于空白組及NC組(P<0.?05),空白組與NC組間侵襲細(xì)胞數(shù)??差異無顯著性(P>〇.?05)。??XWLC-05?細(xì)胞:空白組(253.?0?±?11.?58?N=5)?/HP;?NC?組(276.?8?±?5.?426?N=5)??/HP;?miR-34a-mimics?組(65.?60?±?1.631?N=5)?

細(xì)胞,劃痕


-議__??馨學(xué):懸獨'??x-。5,顏|_響祕?<量??^^SM.隨趨??BLANK?組?NC?組?miR-34a-minics?組??A?B??p<?0.0001?P<?0.0001??M?二T?:rK?,1?£j£。!?=rK??S?1000?■?-nr*?■?miR-34a-mimics?g?—j—?■?mR-34a-mimics??j:_*?丨:l??/……/??/■?XWLC-05??圖4?A?Transwell侵襲實驗檢測miR-34a對A549細(xì)胞侵襲能力的影響??圖4?B?Transwell侵襲實驗檢測miR_34a對XWLC-05細(xì)胞侵襲能力的影響??4.?miR-34a可抑制A549、XWLC-05細(xì)胞的遷移能力(劃痕實驗)??細(xì)胞劃痕實驗用來觀察各組細(xì)胞遷移運動能力變化。我們通過測量細(xì)胞向劃??痕區(qū)的遷移距離來評估其遷移運動能力。如圖5所示,我們進行了?XWLC-05和??A549細(xì)胞:空白組、NC組、miR-34a-mimics組的劃痕實驗。劃痕后24h、48h、??72h觀察細(xì)胞的遷移運動情況,實驗重復(fù)3次。用imagej分析劃痕面積,劃痕??愈合率計算公式為(原始面積-時間點面積)/原始面積。??A549細(xì)胞:空白組平均向劃痕區(qū)遷移率為(0.2627?±?0.004712?N=3)?%,??NC組平均向劃痕區(qū)遷移率為(0.2664?±?0.001183?N=3)?%;兩組間差異無顯??著性(P>0.?05)。而高表達miR-34a的miR-34a_mimics組細(xì)胞平均向劃痕區(qū)遷??移率為(0.2502?±?0.003235?N=3)?%,稍低于空白組和NC組


本文編號:3341611

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