為了制備得到能夠識(shí)別EGFRvⅢ的ChiMR1-阿霉素（DOX）抗體偶聯(lián)藥物,并研究其抗腫瘤活性。本研究利用葡聚糖T10為連接子,將其與阿霉素及ChiMR1抗體在室溫下進(jìn)行縮合反應(yīng),生成ChiMR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物,并通過(guò)分別測(cè)定DOX小分子和抗體ChiMR1的濃度以確定其偶聯(lián)比。利用ELISA和MTS法檢測(cè)ChiMR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物對(duì)DK-MG細(xì)胞（表達(dá)EGFRvⅢ）和U-87MG細(xì)胞（表達(dá)EGFR）的親和性和殺傷效果,研究ChiMR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物的靶向性和抗腫瘤活性。其中Western blotting結(jié)果表明ChiMR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物在72 kD左右出現(xiàn)一條彌散條帶,而ChiMR1抗體和陰性對(duì)照無(wú)此條帶,表明ChiMR1抗體與DOX通過(guò)葡聚糖T10偶聯(lián)成功。ChiMR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物中DOX的濃度為0.162 mg/mL,ChiMR1的濃度為0.802 mg/mL,其偶聯(lián)比約為1∶10。細(xì)胞ELISA結(jié)果顯示ChiMR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物能準(zhǔn)確識(shí)別表達(dá)EGFRvⅢ的DK-MG細(xì)胞,而不能識(shí)別表達(dá)EGFR抗體的U-87MG細(xì)胞。MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明制備... 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

偶聯(lián)藥物的Western blotting鑒定

以DK-MG細(xì)胞(EGFRvⅢ抗原)和U-87MG細(xì)胞(EGFR抗原)為受試細(xì)胞，利用抗體與抗原的特異性結(jié)合，應(yīng)用MTS法考察Chi MR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物對(duì)DK-MG和U-87MG細(xì)胞的生長(zhǎng)影響。結(jié)果顯示：不同濃度的DOX作用于DK-MG和U-87MG細(xì)胞后，隨著DOX濃度的增加，均能不同程度的抑制DK-MG和U-87MG細(xì)胞的生長(zhǎng)，說(shuō)明DOX對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較高的毒性，但無(wú)靶向性；不同濃度的Chi MR1抗體作用于DK-MG和U-87MG細(xì)胞后，不影響DK-MG和U-87MG細(xì)胞的生長(zhǎng)，說(shuō)明Chi MR1抗體無(wú)細(xì)胞毒性；不同濃度的Chi MR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物用于DK-MG和U-87MG細(xì)胞后，隨著Chi MR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物濃度的增加，能顯著性抑制DK-MG的生長(zhǎng)，而對(duì)U-87MG細(xì)胞的生長(zhǎng)基本無(wú)作用，說(shuō)明Chi MR1-DOX抗體偶聯(lián)藥物能特異性抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)(表1;表2)。圖3 阿霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

阿霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茶多糖對(duì)阿霉素抑制肺癌A549細(xì)胞增殖作用的影響[J]. 魏楠,朱強(qiáng)強(qiáng),陳際名,李彤,李亦凡,黃業(yè)偉,馬嘯,王宣軍,盛軍.  茶葉科學(xué). 2016(05)

博士論文
[1]幾種抗CD20抗體偶聯(lián)藥物的制備與生物學(xué)活性初步研究[D]. 李朝輝.浙江大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3337037