研究目的:探討NFκB信號(hào)通路抑制劑ACT001在乳腺癌他莫昔芬耐藥中的作用及機(jī)制。研究方法:選取MCF7、T47D以及ZR7530細(xì)胞系作為研究細(xì)胞。MTT法檢測(cè)他莫昔芬、ACT001單藥以及ACT001聯(lián)合他莫昔芬對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的抑制作用。二維克隆實(shí)驗(yàn)研究不同藥物對(duì)細(xì)胞克隆形成能力的影響。慢病毒包被,導(dǎo)入熒光凋亡蛋白VC3AI,通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光來觀察細(xì)胞凋亡情況。Annexin V-FITC/PI雙染通過流式儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。慢病毒包被轉(zhuǎn)導(dǎo)NFκB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白突變質(zhì)粒（p CDH-CMV-IKBα（S32A,S262A）、p CDH-CMV-IKKβ（S177E,S181E））以及空載體（p CDH-CMV-VECTOR）,puro藥篩構(gòu)建NFκB信號(hào)通路持續(xù)激活以及NFκB信號(hào)通路持續(xù)抑制細(xì)胞系。Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NFκB信號(hào)通路負(fù)相關(guān)蛋白IKBα表達(dá)水平。免疫熒光檢測(cè)藥物處理細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)NFκB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白P65入核情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)他莫昔芬耐藥細(xì)胞MCF7R/LCC9細(xì)胞內(nèi)NFκB m RNA水平以及NFκB相關(guān)凋亡蛋白、抗凋... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

聯(lián)合ACT001和他莫昔芬可以抑制細(xì)胞增殖以及克隆形成不同濃度他莫昔芬和ACT001單藥或者聯(lián)合處理T47D(a)、MCF7(b)和ZR7530（c）細(xì)胞48h；

27圖 2 聯(lián)合 ACT001 和他莫昔芬可促進(jìn)細(xì)胞凋亡 分別用 10μM 他莫昔芬, 20 μMACT001 單藥或者聯(lián)合作用于 MCF7/VC3AI 和 ZR7530/VC3AI 細(xì)胞。熒光顯微鏡觀察拍照（a）；選擇同樣的處理方式藥物作用于 MCF7 和 T47D 細(xì)胞系，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率（圖 2b）。2.3 他莫昔芬可以激活 NFκB 信號(hào)通路有研究發(fā)現(xiàn) NFκB 信號(hào)通路的活化參與激素受體陽(yáng)性乳腺癌他莫昔芬耐藥性的發(fā)生[29]。ACT001 可以有效抑制 NFκB 信號(hào)通路的活化，那么 NFκB 信號(hào)通路在他莫昔芬促細(xì)胞凋亡中發(fā)揮什么樣的作用未見相關(guān)報(bào)道。為了證實(shí) NFκB 信號(hào)通路在他莫昔芬耐藥中發(fā)揮的具體作用，首先通過 Western Blot 檢測(cè)驗(yàn)證他莫昔芬作用于乳腺癌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi) NFκB 信號(hào)通路負(fù)相關(guān)蛋白 IKBα表達(dá)量，研究結(jié)果表明，他莫昔芬處理乳腺癌細(xì)胞 48h 后細(xì)胞內(nèi) IKBα表達(dá)量下降（圖 3b）。免

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 2. 結(jié)果疫熒光檢測(cè) P65 發(fā)現(xiàn)，他莫昔芬作用 48h 后細(xì)胞內(nèi) P65 入核增多，NFκB 信號(hào)路抑制劑 ACT001 聯(lián)合他莫昔芬時(shí)，未見明顯入核（圖 3a）。實(shí)時(shí)熒光定量 P檢測(cè)細(xì)胞 mRNA 水平提示，他莫昔芬作用后細(xì)胞內(nèi) NFκB mRNA 水平上升，聯(lián)合 ACT001 細(xì)胞內(nèi) NFκB mRNA 水平上升不明顯（圖 3c-d）。


本文編號(hào)：3336681