研究目的:多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是最常見的一類惡性漿細(xì)胞腫瘤,由于單克隆漿細(xì)胞惡性增殖、廣泛浸潤并分泌大量單克隆免疫球蛋白（M蛋白）從而引起廣泛骨質(zhì)破壞、感染、貧血、高鈣血癥及腎功能不全。近年來,隨著新藥的臨床應(yīng)用以及自體干細(xì)胞移植的廣泛開展對初診及難治復(fù)發(fā)患者的緩解率及無病生存期得到明顯改善。然而,MM仍然是一種無法治愈的疾病。因此,需要我們進(jìn)一步探索MM的發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,尋找到更新、更有效的診斷和治療靶點(diǎn)提供重要的生物學(xué)依據(jù)。PIWI蛋白互作RNA（PIWI interacting RNA,pi RNA）是一類新發(fā)現(xiàn)的nc RNA,長度為21-35 nt。它通常與Argonaute蛋白的PIWI亞家族結(jié)合發(fā)揮作用并與生殖系發(fā)育中的轉(zhuǎn)座子沉默有關(guān)。盡管過去的研究認(rèn)為pi RNA僅在性腺細(xì)胞中起作用,但最近的研究表明,pi RNA在多種腫瘤中存在差異表達(dá),并有效的控制不同類型腫瘤的生物學(xué)功能,如腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和分化,可能成為腫瘤的潛在生物標(biāo)志物。在多發(fā)性骨髓瘤方面,關(guān)于pi RNA的作用機(jī)制研究很少,目前僅有一個pi RNA,pi RN... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小RNA實(shí)驗(yàn)操作流程圖

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文11B.吸取10μl混勻的DNA樣品緩慢打入瓊脂糖凝膠孔道中，避免槍頭扎到膠；C.打開電泳儀，調(diào)整參數(shù)，恒壓100V，電流調(diào)至最大，運(yùn)行時間設(shè)置為2h，開始實(shí)驗(yàn)。4）凝膠成像電泳結(jié)束后，將瓊脂糖凝膠居中放入凝膠成像儀，選擇自動曝光，得到成像結(jié)果。2.3統(tǒng)計學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過GraphPadPrism7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計圖繪制及統(tǒng)計學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)對兩組臨床樣本進(jìn)行比較，使用單因素方差分析ANOVA進(jìn)行多樣本組間統(tǒng)計學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示。p<0.05具有統(tǒng)計學(xué)有意義。3結(jié)果3.1外泌體小RNA測序篩選MM中顯著高表達(dá)的piRNA測序結(jié)果表明：MM患者及正常人外泌體小RNA測序篩選出1521個表達(dá)上調(diào)的piRNAs及498個表達(dá)下調(diào)的piRNAs（FoldChange≥2.0，p-value＜0.05）。MM患者與正常人骨髓上清液外泌體中表達(dá)上調(diào)最明顯的16個piRNAs聚類熱圖如圖1.1所示。圖1.13例MM患者及3例正常人骨髓樣本中外泌體小RNA測序分析及鑒定出16個顯著上調(diào)的piRNAs。

外泌體的鑒定


本文編號：3332185