研究背景:肝細(xì)胞癌（以下簡稱肝癌）,是我國目前普遍的惡性腫瘤之一。其中90%以上患者的肝癌與乙型肝炎相關(guān)。以手術(shù)切除為主,經(jīng)動脈化療栓塞,射頻消融等為輔的治療方法雖然對患者的預(yù)后有所幫助,但對晚期肝癌并無顯著療效。因此,探索肝癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,尋找肝癌治療的新靶點(diǎn),對于提高肝癌患者生存率至關(guān)重要。由于無限制增殖以及血管生成異常,包括肝癌在內(nèi)的實(shí)體腫瘤內(nèi)部普遍缺氧。HIF1α是缺氧誘導(dǎo)因子HIF1的關(guān)鍵亞基,在缺氧時(shí)穩(wěn)定,參與調(diào)控腫瘤干性相關(guān)基因的表達(dá)。泛素特異性肽酶USP22在前期研究中被認(rèn)為是腫瘤干性標(biāo)志物,本研究團(tuán)隊(duì)前期已發(fā)現(xiàn)USP22可通過促進(jìn)MRP1表達(dá)調(diào)控肝癌細(xì)胞對化療藥物耐藥。TP53作為最重要的抑癌基因之一,在乙肝相關(guān)肝癌患者中突變頻率高。本研究發(fā)現(xiàn)USP22在缺氧條件下促進(jìn)HIF1α的表達(dá);而HIF-1α在TP53基因突變時(shí)可反向促進(jìn)USP22的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。因此,本項(xiàng)目研究在缺氧條件下USP22/HIF1α對肝癌耐藥、轉(zhuǎn)移、成瘤等干性表型的影響,闡明在分子層面USP22與HIF1α的相互調(diào)節(jié)機(jī)制,評估在肝癌組織標(biāo)本中USP22/HIF1α的表達(dá)狀態(tài)及關(guān)聯(lián)性,驗(yàn)證USP... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

USP22對腫瘤干性相關(guān)基因表達(dá)的影響

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文3.2USP22在缺氧條件下促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖在PLC/PRF/5和BEL各組間細(xì)胞數(shù)的變化。如圖USP22表達(dá)降低組的細(xì)胞數(shù)為對照組的20%。在BEL-7402細(xì)胞系中和BEL-7402細(xì)胞系中過表達(dá)過表達(dá)組細(xì)胞數(shù)為對照組的細(xì)胞中，則分別為134%，圖3.2細(xì)胞計(jì)數(shù)測定圖注：A在PLC/PRF/5氧（20%O2）或缺氧（20%O數(shù)(NC，對照組；shUSP22癌細(xì)胞系中過表達(dá)USP22小時(shí)，臺盼藍(lán)染色后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)15EL-7402細(xì)胞系中降低USP22的表達(dá)，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測如圖3.2A所示，在PLC/PRF/5細(xì)胞系中，常氧條件培養(yǎng)的60%左右，而缺氧培養(yǎng)時(shí)則小于對照組的細(xì)胞系中，兩組數(shù)據(jù)則分別為65%，40%。如圖3.2USP22。48小時(shí)后，在SK-Hep-1細(xì)胞中129%，缺氧培養(yǎng)是則為對照組148%。197%。USP22對常氧及缺氧培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞增殖影響和BEL-7402肝癌細(xì)胞系中降低USP222）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，臺盼藍(lán)染色后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)，USP22表達(dá)降低組)。B在SK-Hep-1和，在常氧（20%O2）或缺氧（20%O2）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)臺盼藍(lán)染色后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)（NC，對照組；USP22，USP22第一部分結(jié)果通過細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測常氧條件培養(yǎng)的而缺氧培養(yǎng)時(shí)則小于對照組的3.2B，在SK-Hep-1,常氧培養(yǎng)的。在BEL-7402的表達(dá)，在常臺盼藍(lán)染色后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)BEL-7402肝48過表達(dá)組）。

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文3.3USP22在缺氧條件下促進(jìn)肝癌細(xì)胞克隆形成如圖3.3A所示，在PLC/PRF/5增多以及克隆的體積增大少并且克隆體積顯著減小達(dá)USP22在缺氧條件下導(dǎo)致了克隆數(shù)目顯著增加并且克隆體積顯著增大圖3.3USP22圖注：A在PLC/PRF/5降低組（shUSP22），常氧克隆形態(tài)。B在SK-Hep過表達(dá)組（USP22）,常氧或缺氧培養(yǎng)16和BEL-7402細(xì)胞系中，缺氧促進(jìn)了克隆數(shù)目增多以及克隆的體積增大。降低USP22的表達(dá)在缺氧條件下導(dǎo)致克隆數(shù)目顯著減少并且克隆體積顯著減校如圖3.3B所示，在SK-Hep-1和BEL-7402在缺氧條件下對肝癌細(xì)胞克隆形成的影響細(xì)胞和BEL-7402細(xì)胞中構(gòu)建對照組（（20%O2）或缺氧（1%O2）培養(yǎng)10天后Hep-1細(xì)胞和BEL-7402細(xì)胞中構(gòu)建對照組（10天后，顯微鏡觀察克隆形態(tài)第一部分結(jié)果缺氧促進(jìn)了克隆數(shù)目7402的中，過表在缺氧條件下導(dǎo)致了克隆數(shù)目顯著增加并且克隆體積顯著增大。的影響（NC）和USP22天后，顯微鏡觀察（NC）和USP22顯微鏡觀察克隆形態(tài)。（*p<0.05）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Recent advances in multidisciplinary management of hepatocellular carcinoma[J]. Asmaa I Gomaa,Imam Waked.  World Journal of Hepatology. 2015(04)
[2]凝膠電泳法及熒光光度法測定siRNA陽離子脂質(zhì)體的含量和包封率[J]. 沈雁,涂家生,龐卉,朱家壁.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2009(04)



本文編號：3328513