目的:觀察及對比NK細胞、i NKT細胞及γδT細胞的體外擴增效率、表面標志表達及細胞因子分泌情況,并對比其對腫瘤細胞株的殺傷效果,為免疫細胞的臨床抗腫瘤應用提供參考。方法:1.三種免疫細胞的擴增培養(yǎng)及功能檢測采集健康供者的靜脈血,使用Ficoll密度梯度離心獲得PBMCs,檢測細胞數(shù)量、CD56等表面標志表達情況及顆粒酶B等細胞因子分泌情況后,分別培養(yǎng)擴增3種免疫細胞。（1）NK細胞擴增培養(yǎng)用含5%血清、500U/ml IL-2、2ng/ml IL-15、1μg/ml OK432的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時,后更換為含5%血清、1000U/ml IL-2、2ng/ml IL-15的RPMI-1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),第14天獲得NK細胞。（2）i NKT細胞擴增培養(yǎng)用含有10%血清、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基懸浮PBMCs,加入終濃度為100ng/ml的α-Gal Cer,置于37℃、飽和濕度的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第4天和第7天補加終濃度為100ng/ml的α-Gal Cer和終濃度為20IU/ml的IL-2,之后每3-4天補充... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 綜述 NK/iNKT細胞及γδT細胞的生物學特性及抗腫瘤作用
    2.1 NK細胞
        2.1.1 NK細胞的發(fā)育
        2.1.2 NK細胞的分類
        2.1.3 NK細胞的作用機制
        2.1.4 NK細胞的體外擴增
        2.1.5 NK細胞的抗腫瘤應用
    2.2 iNKT細胞
        2.2.1 iNKT細胞的發(fā)育
        2.2.2 iNKT細胞的作用及作用機制
        2.2.3 iNKT細胞的體外擴增
        2.2.4 iNKT細胞的抗腫瘤應用
    2.3 γδT細胞
        2.3.1 γδT細胞的發(fā)育
        2.3.2 γδT細胞的分類
        2.3.3 γδT細胞的作用機制
        2.3.4 γδT細胞的體外擴增
        2.3.5 γδT細胞的抗腫瘤應用
    2.4 總結
第3章 材料與方法
    3.1 細胞準備
    3.2 試劑準備
    3.3 實驗儀器準備
    3.4 實驗方法
        3.4.1 分離PBMCs
        3.4.2 腫瘤細胞株培養(yǎng)方法
        3.4.4 iNKT細胞的培養(yǎng)
        3.4.5 γδT細胞的培養(yǎng)
        3.4.6 免疫表型檢測方法
        3.4.7 顆粒酶B的胞內檢測
        3.4.8 細胞因子檢測
        3.4.9 細胞毒作用檢測
    3.5 統(tǒng)計學方法
第4章 結果
    4.1 培養(yǎng)前后細胞數(shù)量變化
    4.2 三種細胞培養(yǎng)后表面標志表達情況
    4.3 細胞因子分泌情況
        4.3.1 培養(yǎng)后顆粒酶B分泌情況
        4.3.2 其他細胞因子
    4.4 培養(yǎng)后免疫細胞對腫瘤細胞株殺傷效率
        4.4.1 每種免疫細胞對不同腫瘤細胞株殺傷效果
        4.4.2 不同免疫細胞對每種腫瘤細胞株的殺傷效率
第5章 討論
    5.1 培養(yǎng)前后細胞數(shù)量變化
    5.2 細胞表面標志表達變化
    5.3 細胞因子分泌情況
    5.4 腫瘤殺傷效果
        5.4.1 每種免疫細胞對不同腫瘤細胞殺傷效果
        5.4.2 不同免疫細胞對每種腫瘤細胞的殺傷效果
第6章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]γδT細胞的分類及其功能特質研究的新進展[J]. 吳啟洪,朱婷婷,馮婷,李虹.  醫(yī)學綜述. 2016(13)
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博士論文
[1]再生障礙性貧血骨髓TCRVα24+Vβ11+自然殺傷T細胞體外活化特性研究[D]. 王迎雪.山東大學 2008

碩士論文
[1]人臍血樹突狀細胞體外培養(yǎng)及免疫功能的研究[D]. 郭松佳.山西醫(yī)科大學 2006



本文編號：3325392