目的:觀察及對比NK細(xì)胞、i NKT細(xì)胞及γδT細(xì)胞的體外擴增效率、表面標(biāo)志表達及細(xì)胞因子分泌情況,并對比其對腫瘤細(xì)胞株的殺傷效果,為免疫細(xì)胞的臨床抗腫瘤應(yīng)用提供參考。方法:1.三種免疫細(xì)胞的擴增培養(yǎng)及功能檢測采集健康供者的靜脈血,使用Ficoll密度梯度離心獲得PBMCs,檢測細(xì)胞數(shù)量、CD56等表面標(biāo)志表達情況及顆粒酶B等細(xì)胞因子分泌情況后,分別培養(yǎng)擴增3種免疫細(xì)胞。（1）NK細(xì)胞擴增培養(yǎng)用含5%血清、500U/ml IL-2、2ng/ml IL-15、1μg/ml OK432的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時,后更換為含5%血清、1000U/ml IL-2、2ng/ml IL-15的RPMI-1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),第14天獲得NK細(xì)胞。（2）i NKT細(xì)胞擴增培養(yǎng)用含有10%血清、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基懸浮PBMCs,加入終濃度為100ng/ml的α-Gal Cer,置于37℃、飽和濕度的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第4天和第7天補加終濃度為100ng/ml的α-Gal Cer和終濃度為20IU/ml的IL-2,之后每3-4天補充... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 綜述 NK/iNKT細(xì)胞及γδT細(xì)胞的生物學(xué)特性及抗腫瘤作用
    2.1 NK細(xì)胞
        2.1.1 NK細(xì)胞的發(fā)育
        2.1.2 NK細(xì)胞的分類
        2.1.3 NK細(xì)胞的作用機制
        2.1.4 NK細(xì)胞的體外擴增
        2.1.5 NK細(xì)胞的抗腫瘤應(yīng)用
    2.2 iNKT細(xì)胞
        2.2.1 iNKT細(xì)胞的發(fā)育
        2.2.2 iNKT細(xì)胞的作用及作用機制
        2.2.3 iNKT細(xì)胞的體外擴增
        2.2.4 iNKT細(xì)胞的抗腫瘤應(yīng)用
    2.3 γδT細(xì)胞
        2.3.1 γδT細(xì)胞的發(fā)育
        2.3.2 γδT細(xì)胞的分類
        2.3.3 γδT細(xì)胞的作用機制
        2.3.4 γδT細(xì)胞的體外擴增
        2.3.5 γδT細(xì)胞的抗腫瘤應(yīng)用
    2.4 總結(jié)
第3章 材料與方法
    3.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
    3.2 試劑準(zhǔn)備
    3.3 實驗儀器準(zhǔn)備
    3.4 實驗方法
        3.4.1 分離PBMCs
        3.4.2 腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)方法
        3.4.4 iNKT細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.4.5 γδT細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.4.6 免疫表型檢測方法
        3.4.7 顆粒酶B的胞內(nèi)檢測
        3.4.8 細(xì)胞因子檢測
        3.4.9 細(xì)胞毒作用檢測
    3.5 統(tǒng)計學(xué)方法
第4章 結(jié)果
    4.1 培養(yǎng)前后細(xì)胞數(shù)量變化
    4.2 三種細(xì)胞培養(yǎng)后表面標(biāo)志表達情況
    4.3 細(xì)胞因子分泌情況
        4.3.1 培養(yǎng)后顆粒酶B分泌情況
        4.3.2 其他細(xì)胞因子
    4.4 培養(yǎng)后免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞株殺傷效率
        4.4.1 每種免疫細(xì)胞對不同腫瘤細(xì)胞株殺傷效果
        4.4.2 不同免疫細(xì)胞對每種腫瘤細(xì)胞株的殺傷效率
第5章 討論
    5.1 培養(yǎng)前后細(xì)胞數(shù)量變化
    5.2 細(xì)胞表面標(biāo)志表達變化
    5.3 細(xì)胞因子分泌情況
    5.4 腫瘤殺傷效果
        5.4.1 每種免疫細(xì)胞對不同腫瘤細(xì)胞殺傷效果
        5.4.2 不同免疫細(xì)胞對每種腫瘤細(xì)胞的殺傷效果
第6章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在學(xué)期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]再生障礙性貧血骨髓TCRVα24+Vβ11+自然殺傷T細(xì)胞體外活化特性研究[D]. 王迎雪.山東大學(xué) 2008

碩士論文
[1]人臍血樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)及免疫功能的研究[D]. 郭松佳.山西醫(yī)科大學(xué) 2006



本文編號：3325392