目的:CEACAM6通過多種途徑調(diào)控消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但在膽囊癌中的作用未曾報道。本研究旨在探討CEACAM6基因沉默對膽囊癌細(xì)胞系增殖,遷移,侵襲和凋亡的影響。為進(jìn)一步膽囊癌基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。方法:GBC-SD和SGC-996細(xì)胞系在對數(shù)生長期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用CEACAM6作為不同位點(diǎn)的靶標(biāo)建立兩種不同的si RNA重組表達(dá)載體。qRT-PCR和Western印跡分析分別用于檢測CEACAM6的mRNA和蛋白表達(dá)。使用增強(qiáng)型CCK8細(xì)胞活力測定試劑和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖。使用Transwell測定細(xì)胞遷移和侵襲的變化,并檢測沉默CEACAMA6后細(xì)胞中侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測量細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布,并檢測沉默CEACAMA6后凋亡相關(guān)蛋白變化。結(jié)果:CEACAM6 si RNA組中的CEACAM6 mRNA和蛋白表達(dá)顯著低于NC組和空白組中的表達(dá)。與NC組相比,CEACAM6 si RNA組細(xì)胞增殖明顯減少,但細(xì)胞凋亡率明顯增加,CEACAM6si RNA組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)顯著降低,抗凋亡蛋白Blc-2表達(dá)顯著增加。此外,在CEACAM6 si R... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

用RT-PCR法檢測CEACAM6敲擊的效率

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文10圖2.A為用Westernblotting方法檢測CEACAM6基因敲除效率。B為CEACAM6的蛋白表達(dá)，是靶蛋白與其相應(yīng)的GAPDH蛋白的比值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均±標(biāo)準(zhǔn)差，**P<0.01。3.2CEACAM6siRNA抑制SGC-996和GBC-SD細(xì)胞的增值實(shí)驗(yàn)分為NCsiRNA組和CEACAM6siRNA組，CCK-8測定結(jié)果和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(圖3)，CEACAM6siRNA組隨時間延長增殖能力逐漸減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。另外，平板克隆實(shí)驗(yàn)展現(xiàn)相同的結(jié)果，提示敲低CEACAM6對膽囊癌細(xì)胞的增值有抑制作用。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖3（A）CCK8測定GBC-SD和SGC-996細(xì)胞3天數(shù)據(jù)變化，（B）GBC-SD細(xì)胞系轉(zhuǎn)染CEACAM6siRNA和NCsiRNA后細(xì)胞集落數(shù)分析。（C）在SGC-996細(xì)胞中轉(zhuǎn)染CEACAM6siRNA和NCsiRNA后細(xì)胞集落數(shù)分析。*P<0.05**P<0.01。3.3CEACAM6siRNA促進(jìn)SGC-996和GBC-SD細(xì)胞的凋亡轉(zhuǎn)染24小時后，各組細(xì)胞凋亡的結(jié)果（圖4），CEACAM6siRNA組Q4象限凋亡細(xì)胞明顯多于NC組，表明CEACAM6siRNA組的早期凋亡率顯著高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Westernblot檢測凋亡相關(guān)蛋白，與NC組相比，CEAAM6siRNA組抗凋亡蛋白Bcl-2明顯減少而凋亡蛋白Bax明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），提示CEACAM6基因沉默可促進(jìn)GBC-SD和SGC-996細(xì)胞的凋亡。


本文編號：3321084