目的:細(xì)胞自食（cell-in-cell）是繼壞死、凋亡、自噬之后的第四種細(xì)胞死亡方式,一些腫瘤組織標(biāo)本中細(xì)胞自食的密度與腫瘤惡性程度正相關(guān),提示細(xì)胞自食可能是腫瘤患者預(yù)后的一個指標(biāo)。白細(xì)胞介素24（Interleukin 24,IL-24）具有廣譜而特異的抗瘤活性,通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和自噬抑制腫瘤增殖,對正常細(xì)胞幾乎沒有毒性影響。為了研究食管癌中細(xì)胞自食和探索IL-24抑瘤活性與細(xì)胞自食的相關(guān)性,本文檢測了食管癌組織標(biāo)本中細(xì)胞自食結(jié)構(gòu),并分析了 IL-24對食管鱗癌細(xì)胞體內(nèi)外細(xì)胞自食的影響。方法:首先,收集75例食管癌患者配對組織標(biāo)本（腫瘤組織,癌旁組織和正常組織）,用 EML（E-cadherin Macrophage Leukocyte）方法（即用 E-cadherin、CD45和CD68分別標(biāo)記上皮細(xì)胞、白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）檢測組織標(biāo)本中的細(xì)胞自食結(jié)構(gòu),并用統(tǒng)計學(xué)方法分析細(xì)胞自食密度與食管癌患者臨床信息和IL-24蛋白表達水平的相關(guān)性。其次,制備四種食管鱗癌細(xì)胞（KYSE140、KYSE150、KYSE450和KYSE510）的裸鼠移植瘤模型,分別用分泌表達rhIL-24的定點... 

【文章來源】：北京交通大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 細(xì)胞自食概念
    1.2 細(xì)胞自食的檢測方法
    1.3 細(xì)胞自食結(jié)構(gòu)形成的機制
    1.4 細(xì)胞自食與腫瘤發(fā)生發(fā)展進程的關(guān)系
    1.5 食管癌的治療現(xiàn)狀
    1.6 IL-24的生物學(xué)活性
    1.7 本研究目的和意義
2 材料
    2.1 細(xì)胞株
    2.2 試劑盒
    2.3 試劑
    2.4 試劑配制
    2.5 儀器設(shè)備
3 方法
    3.1 食管癌組織標(biāo)本收集
    3.2 石蠟切片制備
        3.2.1 組織包埋
        3.2.2 切片
    3.3 H&E染色
    3.4 EML染色
    3.5 重組人IL-24蛋白的親和層析純化
        3.5.1 收集細(xì)胞上清
        3.5.2 親和膠用前處理
        3.5.3 樣品處理
        3.5.4 裝柱
        3.5.5 洗雜蛋白
        3.5.6 洗脫目的蛋白
        3.5.7 親和膠的用后處理
        3.5.8 純化蛋白的超濾濃縮
    3.6 SDS-PAGE
    3.7 Western blot
    3.8 ELISA
    3.9 裸鼠荷瘤實驗
    3.10 MTT實驗
    3.11 細(xì)胞熒光染色
    3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
4 結(jié)果
    4.1 食管癌組織標(biāo)本中細(xì)胞自食與患者臨床信息的相關(guān)性
        4.1.1 食管癌配對組織標(biāo)本中細(xì)胞自食數(shù)量不同
        4.1.2 食管癌腫瘤組織中存在四種類型的細(xì)胞自食
        4.1.3 食管癌腫瘤組織中細(xì)胞自食密度與患者臨床信息的相關(guān)性
    4.2 哺乳動物細(xì)胞表達的rhIL-24的純化和鑒定
    4.3 rhIL-24抑制食管鱗癌細(xì)胞增殖
        4.3.1 表達rhIL-24工程細(xì)胞株對食管鱗癌細(xì)胞體內(nèi)增殖的抑制
        4.3.2 rhIL-24對食管癌細(xì)胞體外增殖的抑制
    4.4 rhIL-24對不同食管鱗癌細(xì)胞自食的影響
        4.4.1 表達rhIL-24工程細(xì)胞株對食管鱗癌細(xì)胞體內(nèi)自食的影響
        4.4.2 rhIL-24對食管鱗癌細(xì)胞體外細(xì)胞自食的影響
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻
作者簡歷及攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3312592