研究背景和目的宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤,近年來(lái),其發(fā)病趨于年輕化。目前已知,基因改變?cè)斐傻墓δ軉适Щ蚬δ塬@得與癌癥進(jìn)展相關(guān),如基因的突變、缺失、拷貝數(shù)畸變和染色體重排等。MicroRNA是一種單鏈非編碼RNA,在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控部分關(guān)鍵基因發(fā)揮作用。通過(guò)激活或抑制mRNA可調(diào)控多個(gè)靶基因表達(dá),改變細(xì)胞的增殖、侵襲、凋亡、遷移、分化等。賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶（Lysine acetyltransferases,KATs）可以乙�；M蛋白和其他非組蛋白基質(zhì),對(duì)染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。在多種癌癥中,也發(fā)現(xiàn)了KAT6B（也稱為MORF和QKF）致癌基因的染色體易位。既往研究表明,miR-487b在結(jié)直腸癌、肺癌、前列腺癌、膽囊癌、膠質(zhì)瘤等癌癥中的失調(diào)可促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)增殖,KAT6B的抑制可以在表觀遺傳學(xué)上誘導(dǎo)細(xì)胞周期退出和細(xì)胞衰老,抑制細(xì)胞增殖。在本課題中,我們擬利用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)探索miR-487b在宮頸癌細(xì)胞中的作用及其與KAT6B的關(guān)系。研究方法及材料培養(yǎng)人宮頸癌細(xì)胞株Hela和C33a,首先將慢病毒包裹的miR-487b前體序列的反義序列（lv-antagomiR-487b）轉(zhuǎn)... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-487b前體序列的反義序列（lv-antagomiR-487b）及其對(duì)照72h后，熒光顯微鏡下熒光表達(dá)情況；C33a細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-487b前體序列的反義序列

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文19Rt-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證lv-antagomiR-487b轉(zhuǎn)染情況圖2：A.Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-487b前體序列的反義序列（lv-antagomiR-487b）后PCR結(jié)果;B.C33a細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-487b前體序列的反義序列（lv-antagomiR-487b）后PCR結(jié)果。宮頸癌細(xì)胞株Hela、C33a轉(zhuǎn)染lv-antagomiR-487b后，miR487b表達(dá)較對(duì)照組明顯下降。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)*p<0.05。4.1.2miR-487b下調(diào)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)速度。按照上述鋪板方式，每種細(xì)胞取同樣數(shù)量接種于6孔板中，分別于鋪板后第1,2,3,4,5,6天觀察同一部位細(xì)胞形態(tài)并記錄該區(qū)域內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目。并根據(jù)（第1+N天計(jì)數(shù)/第1天計(jì)數(shù)），制備曲線以觀察評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)和速度�？梢詮闹苽涞那�中看出，miR-487b下調(diào)后，細(xì)胞增長(zhǎng)數(shù)目較對(duì)照組多且速度快。圖3：觀察并計(jì)數(shù)6天內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)。上圖分別為下調(diào)miR-487b表達(dá)的Hela和C33a細(xì)胞和對(duì)照組生長(zhǎng)曲線。結(jié)果顯示，下調(diào)miR-487b后，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)p<0.05。

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文19Rt-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證lv-antagomiR-487b轉(zhuǎn)染情況圖2：A.Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-487b前體序列的反義序列（lv-antagomiR-487b）后PCR結(jié)果;B.C33a細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-487b前體序列的反義序列（lv-antagomiR-487b）后PCR結(jié)果。宮頸癌細(xì)胞株Hela、C33a轉(zhuǎn)染lv-antagomiR-487b后，miR487b表達(dá)較對(duì)照組明顯下降。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)*p<0.05。4.1.2miR-487b下調(diào)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)速度。按照上述鋪板方式，每種細(xì)胞取同樣數(shù)量接種于6孔板中，分別于鋪板后第1,2,3,4,5,6天觀察同一部位細(xì)胞形態(tài)并記錄該區(qū)域內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目。并根據(jù)（第1+N天計(jì)數(shù)/第1天計(jì)數(shù)），制備曲線以觀察評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)和速度�？梢詮闹苽涞那�中看出，miR-487b下調(diào)后，細(xì)胞增長(zhǎng)數(shù)目較對(duì)照組多且速度快。圖3：觀察并計(jì)數(shù)6天內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)。上圖分別為下調(diào)miR-487b表達(dá)的Hela和C33a細(xì)胞和對(duì)照組生長(zhǎng)曲線。結(jié)果顯示，下調(diào)miR-487b后，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)p<0.05。


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